[发明专利]一种β-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶突变体及应用

权利要求书

1.一种组合物，其含有一种酶，其特征在于，所述酶具有葡萄糖苷酶的活性，所述葡萄糖苷酶的活性在纤维素降解中提供降解的功能，所述酶为如下(b)的蛋白质：

(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代一个或几个氨基酸且具有葡萄糖苷酶活性的由(a)衍生的蛋白质：所述酶为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第335位的天冬酰胺、第341位的谷氨酰胺和第343位的丝氨酸均被取代为色氨酸，或，所述酶为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列第336位的丝氨酸被取代为苯丙氨酸、第341位的谷氨酰胺被取代为色氨酸和第343位的丝氨酸被取代为色氨酸，或，所述酶为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第341位的谷氨酰胺和第343位的丝氨酸均被取代为色氨酸。

2.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码如权利要求1中所述的酶。

3.一种重组载体，其特征在于，其含有权利要求2所述的DNA分子和与所述DNA分子可操作地连接的用于表达的调节序列。

4.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求2所述的DNA分子或权利要求3所述的重组载体。

5.一种产生编码酶突变体的核苷酸序列的方法，其特征在于，包括：

步骤一、从桧状青霉(Penicillium piceum)H16中克隆得到如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，并将所述多核苷酸序列连接到用于表达的调节序列上，构建得到带有所述核苷酸序列的连接子，之后通过将所述连接子转化到宿主细胞中，得到含有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列的重组载体；

步骤二、利用第一对突变引物，以步骤一得到的重组载体为模板，通过聚合酶链式反应方法进行循环延伸扩增得到PCR产物；以及，

步骤三、分别利用第二对突变引物和第三对突变引物，以步骤二中得到的PCR产物为模板，再次通过聚合酶链式反应方法进行循环延伸扩增得到对应的PCR产物，之后通过将再次得到的对应的PCR产物各自转化到宿主细胞中，以得到含有突变位点的目的重组载体；

所述步骤二中，所述第一对突变引物的其中一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:11所示，另一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:12所示，SEQ ID NO:11的碱基序列与SEQ ID NO:12的碱基序列反向互补；

所述步骤三中，所述第二对突变引物的其中一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:13所示，另一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:14所示，SEQ ID NO:13的碱基序列与SEQ ID NO:14的碱基序列反向互补；

所述第三对突变引物的其中一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:15所示，另一条引物的碱基序列如SEQ ID NO:16所示，SEQ ID NO:15的碱基序列与SEQ ID NO:16的碱基序列反向互补。

6.如权利要求5所述的产生编码酶突变体的核苷酸序列的方法，其特征在于，所述步骤三中，将再次得到的PCR产物转化到宿主细胞中之前，还包括将再次得到的PCR产物利用DpnI内切酶于温度37℃下处理3h。