[发明专利]复方氨基酸（15）双肽（2）注射液氨基酸和甘氨酰谷氨酰胺含量检测方法

权利要求书

1.复方氨基酸（15）双肽（2）注射液氨基酸和甘氨酰谷氨酰胺含量检测方法，其特征在于，该方法包括精密量取被测样品及对照品溶液，注入带磺酸基强酸性阳离子交换树脂LCAK06/Na柱的色谱仪，通过流动相缓冲液A、B和再生液进行梯度洗脱与再生平衡，以及衍生试剂茚三酮溶液进行柱后衍生反应，在检测波长为440nm和570nm下记录色谱图，按外标法以峰面积计算；

其中，所述流动相缓冲液A的配制为：二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、乙醇65ml、37%的盐酸5.6ml、辛酸0.1ml置1000ml量瓶中，加水定容至刻度，调pH至2～4；

所述流动相缓冲液B的配制为：二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g、辛酸0.1ml置1000ml量瓶中，加水定容至刻度，调pH至10～11；

所述再生液的配制为：氢氧化钠20g、EDTA 0.2g置1000ml量瓶中，加水定容至刻度；

所述衍生试剂茚三酮溶液的配制为：取茚三酮2g，加乙醇溶解至100mL。

2.如权利要求1所述的复方氨基酸（15）双肽（2）注射液氨基酸和甘氨酰谷氨酰胺含量检测方法，其特征在于，所述流动相缓冲液A的pH为3.45，流动相缓冲液B的pH为10.85。

3.如权利要求1所述的复方氨基酸（15）双肽（2）注射液氨基酸和甘氨酰谷氨酰胺含量检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1. 制备被测样品溶液：精密称取被测样品5ml，置于50ml容量瓶中，用样品稀释液定容至刻度，摇匀；再精密量取定溶液2ml，用样品稀释液定容至100ml，摇匀，即得；所述样品稀释液为取36%盐酸1.5ml稀释至1000ml；

S2. 制备对照品溶液:精密称取对照品，用样品稀释液制成每1ml中含有门冬氨酸0.34mg、谷氨酸0.56mg、丝氨酸0.45mg、组氨酸0.68mg、甘氨酰谷氨酰胺3.027mg、精氨酸1.13mg、苏氨酸0.56mg、丙氨酸1.6mg、脯氨酸0.68mg、缬氨酸0.73mg、甲硫氨酸0.56mg、异亮氨酸0.56mg、亮氨酸0.79mg、苯丙氨酸0.585mg、醋酸赖氨酸1.27mg的对照品溶液；所述样品稀释液为取36%盐酸1.5ml稀释至1000ml；

的对照品溶液；所述样品稀释液为取36%盐酸1.5ml稀释至1000ml；

S3. 上样、分离及梯度洗脱：分别将待测样品溶液和对照品溶液20μl注入色谱仪，通过流动相缓冲液A、B和再生液进行梯度洗脱与再生平衡，于高温反应器中采用衍生试剂茚三酮溶液进行柱后衍生反应，在检测波长为440nm和570nm下记录色谱图，按外标法以峰面积计算；

其中，色谱仪的色谱条件为：带磺酸基强酸性阳离子交换树脂LCAK06/Na柱；高温反应器温度为：130℃；茚三酮流速：0.25ml/min；茚三酮停止时间：47min；采集时间：50min；流动相缓冲液A的流速：0.45ml/min；流动相缓冲液B的流速：0.45ml/min；再生液的流速：0.45ml/min；氨基酸分析柱温：57～74℃。

4.如权利要求1-3中任意一项所述的复方氨基酸（15）双肽（2）注射液氨基酸和甘氨酰谷氨酰胺含量检测方法，其特征在于，所述按外标法以峰面积计算公式为供试品标示含量（%）=（供试品溶液峰面积/标准品溶液峰面积）×100%。