[发明专利]预防肺炎链球菌感染性疾病的免疫原性组合物及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，尤其是预防肺炎链球菌感染性疾病的免疫原性组合物及其制备方法。

背景技术

肺炎链球菌是世界范围内引起死亡的重要原因之一，且是肺炎、脑膜炎、中耳炎等侵袭性和非侵袭性感染的重要致病菌。肺炎链球菌常寄生在健康人的鼻咽部，约有40％－70％的人带菌，当机体免疫功能降低时，病菌就会乘虚而入侵入肺部，造成肺炎。肺炎链球菌感染，一是来自自身带菌，当抵抗力降低时，肺炎链球菌向下呼吸道侵犯引起肺炎；二是被来自带菌的别人或患者所传染，引起肺炎。

接种疫苗是有效的特异性预防措施，具有极佳的卫生经济学价值。目前普遍应用的预防肺炎链球菌疾病的疫苗主要有两类，多糖疫苗(23价多糖疫苗，适用于2岁以上适合人群)和多糖蛋白结合疫苗(7价、10价或13价，可用于2岁以下婴幼儿)。

肺炎多糖疫苗为“23价肺炎多糖疫苗”，能覆盖23种经常引起肺炎球菌感染的血清型，约90％的肺炎球菌感染疾病是由这23种血清型引起的。绝大多数健康的成年人，在接种后2-3周内，均能产生抵抗所有或大部分肺炎链球菌的保护性抗体。23价肺炎疫苗可以有效地预防肺炎，已经在美国、加拿大等30多个国家及地区应用14年以上，接种后保护率可达92％，具有良好的安全性，免疫功效可维持5年。2岁以上体弱或反复患肺炎的幼儿及高危人群(如无脾儿童)可以使用。

23价肺炎多糖疫苗所含的荚膜多糖抗原为T细胞非依赖性抗原，可以刺激成熟的B淋巴细胞，但不会刺激T淋巴细胞，此抗原介导的免疫反应持续时间较短，不能产生免疫记忆。2岁以下婴幼儿免疫功能发育尚不完善，对T细胞非依赖性抗原的反应很差，所以多糖疫苗不能诱导婴幼儿产生保护性免疫应答。23价肺炎多糖疫苗不能用于2岁以下儿童的预防。7价肺炎多糖蛋白结合疫苗可以预防疫苗所覆盖7种血清型肺炎链球菌所引起的疾病，国外研究显示，其所包含的7种血清型所导致的疾病约占所有肺炎链球菌感染疾病的80％左右。2006-2007年在我国四所有代表性的儿童医院(北京儿童医院、上海复旦大学附属儿科医院、广州儿童医院和深圳儿童医院)5岁以下住院肺炎儿童中临床分离到279株肺炎链球菌。分析发现主要的致病肺炎链球菌血清型与PCV7所覆盖血清型一致，而这7种血清型占到所有致病肺炎链球菌的81％。这说明7价肺炎结合疫苗在中国同样具有较高的血清型覆盖率。但7价肺炎结合疫苗不能预防疫苗覆盖这7种血清型之外的其他血清型肺炎链球菌的感染。研究表明，其它血清型肺炎链球菌的感染也普遍存在。

肺炎链球菌表面的多种膜蛋白是重要的毒力因子，可作为一种重要的抗原物质，由于外膜蛋白具有保守的组成结构，因此外膜蛋白可诱发交叉免疫作用。肺炎表面蛋白A(PspA)广泛存在于90种肺炎链球菌亚型中，PspA蛋白的a螺旋端是一个重要的抗原决定区域，在不同血清型中有广泛的同源性，根据该端氨基酸序列，PspA蛋白被划分为3个家族(famlily)，再细分为6个支系(clade)。

已有大量的研究报道了PspA蛋白对不同血清型SPN的保护作用，将PspA蛋白作为疫苗成分，可克服多糖蛋白结合疫苗荚膜血清型数量有限且抗蛋白载体抗体对病原菌缺乏特异性保护作用的不足之处。流行性病学调查显示，绝大多数SPN菌PspA属于一、二两家族,临床上很少分离到家族三菌株。本发明所述免疫原性组合物PspA-mRX1来自家族一、PspA-EF5668和PspA-EF3296来自于PspA家族二，以此免疫组合物作为抗原组分，将覆盖95％以上的临床分离株血清型。

溶血素的主要作用是溶血和激活补体，鼻腔和腹膜腔的肺炎链球菌攻击试验证实，重组ply可使老鼠的寿命延长89％和93％。ply氨基酸序列高度保守，抗原性强，因此，ply可以作为覆盖所有血清型抗原疫苗的备选蛋白，该蛋白的疫苗潜能已经在不同的实验室中证实。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种预防肺炎链球菌感染性疾病的免疫原性组合物。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述预防肺炎链球菌感染性疾病的免疫原性组合物的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：