[发明专利]一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法

说明书

本发明涉及生物技术和植物学技术领域，本发明提供了一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，是将外植体接种于MS基本培养基附加2,4‑D、6‑BA、NAA在一定条件下培养得到颜色有光泽呈鲜黄绿色，生长旺盛，疏松的丹参愈伤组织；将上述愈伤组织接种到于与上述所使用的MS固体培养基相同组分和含量的液体培养基中，一定条件下振荡培养，反复继代，得到分散性良好的悬浮细胞系并通过茉莉酸甲酯进行诱导培育出迷迭香酸含量高的丹参细胞系，实现人工培养，达到规模化生产的目的。

技术领域

本发明属于生物技术和植物学技术领域，特别涉及到一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)又名赤参、紫丹参，为唇形科鼠尾草属多年生草本植物丹参的根。丹参中的药用活性成分主要分为丹参酮和丹参酚酸两大类。丹参具有活血化淤、清热解毒、通经、凉血消肿、镇静安神之功效，广泛应用于心脑血管疾病的治疗。

丹参酮(tanshinone)是中药丹参的根的提取物，其中含有丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡB等40余种化合物。丹参酮对心血管系统具有广泛的作用，主要表现为内皮细胞保护作用、抗心肌缺血作用、改善血液代谢作用以及对心肌的保护作用。其作用机制研究证明，丹参酮对内细胞缺血再灌注性损伤有保护作用，可以抑制低密度脂蛋白的氧化，抑制脂制代谢酶的活性，改善脂质代谢过程，对于防治心血管疾病有良好作用(中国专利申请号：200610005271.1，公告号：CN100362993C，发明名称：一种丹参酮乳剂及其制备方法)。

丹参酚酸类化合物是存在于丹参或其同属植物中的酚酸类化合物，其中含有丹参酚酸A、丹参酚酸B(LAB)、迷迭香酸(RA)等多种化合物。丹参酚酸类化合物对于心脑血管具有保护作用。能够抗纤维化，抗肝损伤。可治疗消化性溃疡。还能杀伤癌细胞，增强抗癌药物的疗效，且不会相应增加抗癌药物的毒性。丹参酚类化合物没有明显的毒副作用(中国专利申请号:200510094596.7，公告号：CN1762341B，发明名称：治疗心脑血管疾病、肝脏疾病的丹参酚酸复合物及其应该用)。

迷迭香酸(Rosmarinicacid，简称RosA)是一种天然多功能酚酸类化合物。迷迭香酸具有抑菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、抗血栓抗血小板聚集、防辐射和免疫抑制作用，迷迭香酸对神经系统有抗焦虑作用，对细胞损伤有保护作用，广泛应用于医药、食品、化妆品等方面。最新研究表明，丹参中迷迭香酸有抗艾滋病病毒(HIV)活性(参见文献：William H，William BL.Inhibitors of human immunodeficiency virus type 1reversetranscriptase target distinct phases of early reverse transcription.Journalof virology,2001，75：3095-3104)。

随着丹参有效成分及其药理活性的深入研究，近年来以丹参为主要原料的药品、制剂、化妆品和系列保健产品层出不穷，丹参资源供不应求。伴随着丹参药材需求的日益扩大和野生资源的逐渐减少，质量参差不齐，加剧了丹参的供需矛盾。目前提高丹参有效成份的方法有人工栽培配合茉莉酸诱导，毛状根培养，转基因毛状根培养，茉莉酸诱导毛状根，水杨酸诱导丹参培养细胞等等；提高的成份主要是丹参酮类(包括隐丹参酮、丹参酮IIA、丹参酮I和二氢丹参酮I)和丹酚酸类(包括丹酚酸、丹酚酸B、迷迭香酸和丹酚酸K)。

因此提高丹参中有效成分的含量，尤其是迷迭香酸的含量，对培育优异的丹参资源具有重要意义。

目前尚无文献报道丹参细胞系悬浮细胞培养提高迷迭香酸含量的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，是用丹参细胞系悬浮细胞培养方法，提高丹参中有效成分--迷迭香酸的含量。