[发明专利]一种嗜热链球菌ATCC 14485与芦荟共发酵饮料的制备方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及嗜热链球菌ATCC 14485与芦荟原汁共发酵条件的摸索，并对发酵液的抗氧化能力进行了测定和评价，主要用于今后相关芦荟洗液和芦荟饮品的研制，本发明具体涉及一种嗜热链球菌ATCC 14485与芦荟共发酵饮料的制备方法。

背景技术

    芦荟属百合科草本植物，芦荟凝胶中含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸、维生素、活性酶及对人体十分有益的微量元素。它具有多重功效，美白、保湿、控油、除痘等作用。并且芦荟提取液常添加在食品、药品、牙膏及化妆品中，不仅具有抗细菌、防止皮肤干裂或油脂分泌多、对治疗雀斑、青春痘和防止脱发、去头屑、消炎、愈合伤口、免疫、抗肿瘤都有极好的疗效。

益生菌是指一类对人和动物有益的细菌，指投入后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，提高宿主健康水平和使宿主健康达到最佳状态的活菌制剂及其代谢产物，各种食品中更是添加多种益生菌，增强食品营养价值。

嗜热链球菌被认为是“公认安全性”成分，广泛用于生产一些重要的发酵乳制品，包括酸奶和奶酪，能生产胞外多糖、细菌素和维生素等多种营养物质。

本发明采用嗜热链球菌ATCC 14485与芦荟原汁进行共发酵，探索了发酵液的抗氧化能力，并进行了评价。

发明内容

本发明的目的是提供一种嗜热链球菌ATCC 14485与芦荟共发酵饮料的制备方法，对研制前期的芦荟发酵液最佳条件进行探索，并进行抗氧化性的测定，评价芦荟发酵液产品研制过程中具有的优势。

本发明所述制备方法包括下列步骤：

1、芦荟的选择和制备：采选新鲜、饱满、肉质肥厚的芦荟叶片，剔除带有病斑、软腐的叶片，叶片均重300~400 g；叶片采用75% 酒精进行表面消毒，去除芦荟叶表面皮层，采用榨汁机榨汁，分装后，6000 rpm/min离心10 min，再次分装，制成芦荟原汁，所述芦荟是库拉索芦荟。

2、采用巴氏消毒法将芦荟原汁灭菌，55 ℃处理30 min，4 ℃保存备用。

3、嗜热链球菌ATCC 14485的活化

A、从-80 ℃冰箱取出嗜热链球菌ATCC 14485，按培养基体积的5%接种于5 mL MRS培养基中，于37 ℃恒温培养箱中培养过夜；

B、取过夜培养的嗜热链球菌ATCC 14485，按培养基体积的5%接种5 mL MRS培养基中，二次活化。

4、最佳发酵条件的确定

A、设定发酵温度梯度分别为25 ℃、30 ℃、37 ℃、42 ℃，在上述不同的发酵温度条件下取5 mL芦荟原汁，加入芦荟原汁体积的10%脱脂乳和2%葡萄糖，嗜热链球菌ATCC 14485接种量为芦荟原汁体积的5%，发酵20 h，得到不同温度条件下的芦荟发酵液；

B、取上述各芦荟发酵液，加生理盐水按10¹～10⁶比例稀释，取50　μＬ涂板，过夜培养，进行活菌计数，确定最佳发酵温度；

C、在最佳发酵温度的条件下，设定芦荟原汁PH梯度为3、4、5、6、7、8、9，在上述不同的PH条件下取5 mL芦荟原汁，加入芦荟原汁体积的10%脱脂乳和2%葡萄糖，嗜热链球菌ATCC 14485接种量为芦荟原汁体积的5%，发酵20 h，采用PH计调节PH；

D、取上述各芦荟发酵液，加生理盐水按10¹～10⁶比例稀释，取50　μＬ涂板，过夜培养，进行活菌计数，确定最佳发酵PH。

5、在最佳发酵温度和PH条件下发酵培养：在步骤4确定最佳PH和最佳温度后，取5 mL芦荟原汁，加入芦荟原汁体积的10%脱脂乳和2%葡萄糖，接种芦荟原汁5%的嗜热链球菌ATCC 14485，发酵48 h，10000  rpm/min离心10 min，重新分装，获得嗜热链球菌ATCC 14485芦荟发酵液，4 ℃保存备用。

6、芦荟发酵液抗氧化性指标的测定和后期评价

 A、DPPH自由基清除能力的测定

 取2 ml芦荟发酵液，加入2 ml DPPH乙醇溶液，黑暗下室温反应30min，然后用等体积的三氯甲烷抽提，取上清517 nm测OD，对照为去离子水加DPPH溶液；

B、羟基自由基清除能力的测定

 取2 mmol/L的硫酸亚铁溶液1 mL, 6 mmol/L过氧化氢1 mL, 6 mmol/L水杨酸1 mL, 并加入芦荟发酵液1 mL，静置 30 min，以蒸馏水为参比，在510 nm处测定吸光度，计算羟自由基的清除率；