[发明专利]一种文冠果的组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种文冠果的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

（1）外植体的处理：选择文冠果成熟种胚为外植体，置于60～80℃温水中自然晾却至室温浸泡5～8h,然后用含有0.01～0.05%吐温-20的0.1～0.5%升汞溶液消毒2～10min,无菌水冲洗3～5次，剥去种皮后置于75～80%乙醇溶液中浸泡20～60s，无菌水冲洗3～5次，再用含有0.01～0.05%吐温-20的0.1～0.5%升汞溶液消毒2～5min，无菌水冲洗3～5次后备用；

（2）愈伤组织诱导：将消毒好的种胚切成大约3～5mm³的组织块，并接种到诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养20～30天，然后置于每天光照10～11小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成愈伤组织；

（3）继代培养：愈伤组织生长至15～25天后，将长势良好的愈伤组织转接至继代培养基中进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，25～30天继代一次；

（4）不定芽诱导：将培养至30～40天的长势良好的愈伤组织转接至芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养10～15天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽；

（5）生根培养：将分化出的芽长至3～5cm接种至生根培养基中进行根诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至长出根；

（6）试管苗移栽：将长至8～10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由黄沙土和火碳泥（1：1）混合成的基质中并定植于大田中。

2.根据权利要求1所述的一种文冠果的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+ 1.0～2.0mg/L2,4-D+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种文冠果的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的继代培养基为：MS+0.1～1.0mg/L 2,4-D+0.5～2.0mg/L NAA+0.5～1.0mg/L 6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种文冠果的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的芽诱导培养基为：MS+0.1～1.0mg/L NAA+1.0～3.0mg/L 6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种文冠果的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+1～3mg/L IBA+0.1～0.5mg/L NAA+2.0%～2.5%蔗糖+0.4%～0.6%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。