[发明专利]一种胶原膜的制备方法及胶原膜

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种胶原膜的制备方法及胶原膜。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，它具有屏障、感觉、调节体温、分泌与排泄、参与免疫反应、维持内外环境稳定等功能。随着经济、科技和社会的发展及人类平均寿命的延长，各种外伤特别是烧伤、老年性疾病等引起的皮肤缺损越来越多。自体皮肤移植作为这类皮肤缺损治疗的金标准，在临床应用中取得很大的成效。但是，自体皮肤移植需要把患者身上完好的皮肤通过手术切割下来，再覆盖到患者的皮肤缺损区，相应加大了对患者的打击，且在供皮区有可能形成疤痕及色素沉淀等，对患者造成二次伤害。

为了克服自体皮肤移植的缺陷，出现了多种替代自体皮肤的组织工程皮肤。例如，一种为包含双层活细胞的组织工程皮肤，该组织工程皮肤由表皮活细胞和真皮活细胞构成，虽然非常接近人体皮肤，但是由于活细胞生长及保存条件苛刻，使得该组织工程皮肤保质期短，且生产和保存成本较高，极大的限制了各种皮肤疾病治疗的应用；另一种为只包含真皮层的组织工程皮肤，其中真皮层由成纤维细胞和支架构成，例如可以通过将成纤维细胞接种于支架上培养，成纤维细胞在支架内增殖而形成。该组织工程皮肤虽然成分接近人体真皮，但是在使用时非常容易导致创面感染，也极大的限制了各种皮肤疾病治疗的应用。

所以，为组织工程皮肤的真皮层设置一层有效的保护层，对于组织工程皮肤的应用非常重要。

胶原(Collagen)是细胞外最重要的水不溶性纤维蛋白，是构成细胞外基质的骨架。胶原在哺乳动物体内含量丰富，约占人体或其他动物蛋白的20％-30％。主要存在于软骨、皮肤及肌腱等组织中，在动物体内起支持、保护及连接等多种作用。由于胶原具有良好的生物相溶性、无毒、弱抗原性、可降解性及安全性等优点，因此可以作为天然生物材料。例如，根据其止血功能，可以制作成海绵状用于止血，或者用于敷裹伤口；根据其可降解性可以用作手术缝线；进一步的可作为支架材料用于组织工程医学领域，引导组织再生，促进伤口修复愈合。

例如，公告号为CN 103071189 A的专利提供了一种组织引导再生用胶原膜的制备方法，该方法具体包括如下步骤：将胶原溶于酸性溶液中；将所得溶液的pH值调至5-9；继续将所得溶液快速剪切搅拌，获得胶原乳液；将所得胶原乳液离心，收集溶液上面的胶原膜；所得胶原膜经模具成型，冷冻干燥，采用物理或/和化学方法交联，即可。

现有技术中公开的胶原膜直接通过离心成膜，所得胶原膜比较稀松，适合用于引导组织再生，但是并不适合用于作为组织工程皮肤的真皮层的保护层。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种胶原膜的制备方法及胶原膜，所得胶原膜比较致密，且具有合适的降解性，能够有效保护真皮基质层和避免创面感染。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明实施例提供一种胶原膜的制备方法，包括：

配置胶原蛋白溶液，所述胶原蛋白溶液的pH值为6-8；

将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块；

将所述胶块在交联剂作用下震荡交联并清洗；

将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，得到胶原膜。

优选的，所述配置胶原蛋白溶液，包括；

将胶原蛋白和0.05％-0.5％的乙酸混合，静置溶解；

在冰浴条件下，将溶解后的胶原蛋白溶液中加入酚红溶液，并调节pH值至6-8。

优选的，所述将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块，包括：

将所述胶原蛋白溶液移至凝胶模具中，在37℃下恒温凝胶30min-80min，得到胶块。

优选的，将所述胶块在交联剂作用下震荡交联，包括：

将所述胶块在EDC作用下，室温震荡交联14-40h。

优选的，所述EDC的浓度为10mM-50mM。

优选的，所述将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，包括：

一次压膜：按照0.5kg/胶块-1.5kg/胶块的压力对所述胶块施压5min-15min，然后按照2kg/胶块-5kg/胶块的压力对所述胶块施压40min-70min；

清洗：用纯化水对所述一次压膜后的胶块清洗至少一次；

二次压膜：按照2kg/胶块-5kg/胶块的压力对所述清洗后的胶块再次施压20min-40min。

优选的，所述将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，包括：