[发明专利]口蹄疫病毒衣壳蛋白串联共表达和病毒样颗粒的制备方法

权利要求书

1.口蹄疫病毒衣壳蛋白串联可溶共表达的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将经过密码子优化的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0基因，VP1和VP3的全长基因分别克隆入质粒pETSUMO，分别获得pETSUMO-VP0，pETSUMO-VP1和pETSUMO-VP3三个质粒，其中VP0基因为VP4和VP2的基因融合而成，其核苷酸序列如Seq ID No.1a所示，VP1基因的核苷酸序列如Seq ID No.1b所示，VP3基因的核苷酸序列如Seq ID No.1c所示；

(2)用PCR方法从pETSUMO-VP3，pETSUMO-VP1和pETSUMO-VP0三个质粒中分别扩增出RBS-SUMO-VP3，RBS-SUMO-VP1和RBS-SUMO-VP0DNA片段，按VP3，VP1和VP0顺序克隆入同一个pET28b质粒，获得重组表达质粒pET-TRI-Asia1-VP310，其中RBS指核糖体结合位点；

(3)将所述重组表达质粒pET-TRI-Asia1-VP310转化大肠杆菌，获得基因工程菌；

(4)所述基因工程菌进行发酵培养，IPTG诱导串联可溶共表达带有SUMO标签的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0；

(5)回收基因工程菌菌体破碎后的上清液，亲和色谱层析分离纯化带有SUMO标签的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0蛋白混合物；

(6)酶切去除SUMO标签后，分子筛色谱层析分离纯化获得口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0蛋白混合物，并组装成病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述大肠杆菌为BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述基因工程菌为BL21(DE3)/pET-TRI-Asia1-VP310。

4.由权利要求1-3任意一项所述方法制备得到口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0，VP1和VP3组成的病毒样颗粒，所述VP0蛋白为VP4和VP2的基因融合表达产物，VP0氨基酸序列如SeqID No.2a所示，VP1氨基酸序列如SeqID No.2b所示，VP3氨基酸序列如SeqID No.2c所示。

5.一种用于预防口蹄疫感染的疫苗，其包括：权利要求4的口蹄疫病毒样颗粒，及疫苗用赋形剂或载体。

6.一种由权利要求1-3任意一项所述方法构建得到的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌串联可溶共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3基因，VP1基因和VP0基因；所述VP0基因为VP4和VP2的基因融合，其核苷酸序列如SeqID No.1a所示；VP1基因核苷酸序列如SeqID No.1b所示；VP3基因核苷酸序列如SeqID No.1c所示。