[发明专利]一种降解水体四环素污染物的栖木槿假单胞菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种降解水体四环素污染物的栖木槿假单胞菌及其应用。

背景技术

四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素，其结构均含有并四苯基本骨架。四环素类抗生素是目前世界上使用最广泛、用量最大的抗生素种类之一，近些年来，四环素类抗生素在畜禽和水产养殖过程中作为兽药和饲料添加剂被大量使用，然而这些抗生素未被完全吸收，大部分通过原药和代谢产物的形式排除，其中80％的粪便未经综合处理施用于农田，造成土壤污染。四环素类抗生素进入土壤环境后，通过吸附和分配作用长期存在于土壤环境中。抗生素在环境中持续暴露对生态系统产生明显的毒性效应：抑制微生物的生长代谢，诱发微生物抗性基因污染，破坏土壤中土著微生物群落结构及功能，抑制植物叶绿体活性和根系生长等。四环素对生态和人类健康的危害成为人们普遍关注的对象和研究的热点，其相关研究也得到越来越多的重视。

四环素的降解途径主要包括水解、光解和生物降解，其中，微生物降解是四环素的主要降解途径，也是重要的驱动力之一。在微生物与污染物交互作用中，生物酶是污染物降解过程的直接参与者。微生物通过各类生物酶的作用将抗生素降解转化为能源物质或者对自身无毒害作用的其他代谢产物。因此，筛选到合适的高效的降解菌株显得尤为重要。利用微生物酶的催化作用来处理有机污染物能有效的降低有毒有机污染物的含量，同时还能降低其毒性，因此，微生物降解是一种很有潜力的处理有机污染物的方法，在工业生产的各个方面具有很高的推广价值。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种降解水体四环素污染物的栖木槿假单胞菌及其应用。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种水体四环素污染物降解菌，经鉴定命名为栖木槿假单胞菌DT1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2014年6月4，保藏号为CCTCC NO:M 2014244。

该菌株的菌落形态特征以及生理生化特性为：菌落呈黄色、不透明、圆形、表面光滑，中间隆起、边缘整齐；需氧，革兰氏阴性菌，硝酸盐可以还原成亚硝酸盐；接触酶阳性，氧化酶阳性，脲酶阳性；MR阳性，VP阴性；不产硫化氢，不能淀粉水解；能利用葡萄糖等碳源；最适生长pH值：6.5～9，最适生长温度：25～35℃。

上述栖木槿假单胞菌DT1在降解水体四环素污染物中的应用。

按上述方案，所述栖木槿假单胞菌DT1在降解水体四环素污染物的应用方法为：(1)挑取栖木槿假单胞菌DT1单菌落，于LB液体培养基中培养过夜；(2)取栖木槿假单胞菌DT1菌液，将菌液以体积百分比为0.5％～2％的比例接种于含四环素污染物的废水中，pH值调节为6～9，置于30～35℃的条件下恒温培养48～72小时。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明所述栖木槿假单胞菌DT1在含有四环素污染物的环境中具有较强的生长能力和良好的降解四环素的能力，该菌株能在72小时之内有效降解废水中的四环素有机污染物，降解率达到83.21wt％。本发明为降解四环素有机污染物提供了有用的菌源，同时拓宽了对栖木槿假单胞菌功能方面的应用，因此具有较强的应用价值。

附图说明

图1为栖木槿假单胞菌DT1的16S rDNA分子鉴定过程中PCR产物琼脂糖电泳图(左为Marker；右为扩增产物)。

图2为栖木槿假单胞菌DT1的发育树。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实例。

实施例1栖木槿假单胞菌DT1的筛选：

(一)、材料准备：

1、实验土壤为模拟四环素污染的土壤，取自中国地质大学。

2、培养基：

筛选培养基：10g/L蛋白胨，5g/L氯化钠，0.5g/L磷酸氢二钾，1.5g/L琼脂，pH值7。

液体富集培养基：10g/L蛋白胨，5g/L氯化钠，0.5g/L磷酸氢二钾，pH值7。

LB液体培养基：蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0。

LB固体培养基：蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1000mL，琼脂15g/L(固)，pH7.0。

LB斜面培养基：蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1000mL，琼脂20g/L(固)，pH7.0。

3、实验仪器和设备：