[发明专利]一种人表皮干细胞的分离方法

权利要求书

1.一种人表皮干细胞的分离方法，包括如下步骤：

(1)将离体的人的皮肤组织进行消毒、去除脂肪组织；

(2)将经步骤(1)处理后的皮肤组织用Dispase Ⅱ进行处理；

(3)将经步骤(2)处理后的组织的真皮部分和表皮部分撕开，并将表皮部分剪碎，用胰蛋白酶进行消化处理；

(4)将经步骤(3)消化处理后的体系静置，分别取沉淀和上清液；

(5)将经步骤(4)静置所得的上清液进行终止消化，离心，弃上清，收集沉淀；对所述沉淀进行重悬，得到组织液1；

(6)将经步骤(4)静置所得的沉淀用胰蛋白酶进行消化处理；

(7)将经步骤(6)处理后的体系进行过滤，取滤液；

(8)将经步骤(7)过滤所得的滤液进行终止消化，离心，弃上清，得到组织液2；

(9)将组织液1和组织液2混合，得到组织液3；对所述组织液3进行重悬；

(10)用流式细胞仪对步骤(9)所得的组织液3中的细胞进行筛选，得到所述人表皮干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述人的皮肤组织进行消毒包括如下步骤：将人的皮肤组织放入碘酊中浸泡3min，在放入75％的酒精中浸泡洗涤3min，最后用DPBS浸泡漂洗3次，每次漂洗3min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述在用DispaseⅡ进行处理前还包括将所述经步骤(1)处理后的皮肤组织剪成5mm×5mm小块的步骤。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述用DispaseⅡ进行处理的温度是4℃；所述处理的时间是过夜。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述用胰蛋白酶进行消化处理的方法为将所述剪碎的表皮放入质量分数为0.125％的胰蛋白酶-EDTA溶液中，进行消化处理；所述消化处理的温度为37℃；所述消化处理的时间为10min；所述消化处理的过程中每分钟摇1次。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述终止消化的方法是向所述步骤(4)所得的上清液或步骤(7)所得的滤液中加入培养基1；所述重悬使用培养基1；所述培养基1是含有体积分数为10％的胎牛血清的DMEM培养基。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述过滤的方法为用100μm和40μm的滤膜依次进行过滤。

8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述离心的温度为4℃；所述离心的速度为360g；所述离心时间为8min。

9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述筛选是选择同时具有β1整合素和CD49f细胞表面标志物的细胞。

10.权利要求1-9所述的方法在分离人表皮干细胞中的应用。