[发明专利]小牛脾提取物及在原发免疫性血小板减少症治疗中的用途

说明书

本发明提供了一种小牛脾提取物在原发免疫性血小板减少症治疗中的用途。所述小牛脾提取物的制备工艺为包括匀浆液的制备，冻融，组合酶协同作用，pH调节和膜过滤，以及无菌过滤和灌装。该校牛脾提取物中多肽和核糖提取率大大增加并且糖肽比固定在80‑87之间。小牛脾提取物能够治疗ITP的活性经过血小板计数以及各个免疫器官中CD4+CD25+T比例进行验证，结果显示本发明能够显著提高血小板水平达到原工艺的50%，并改善造血功能，无毒副作用。

技术领域：

本发明涉及一种新工艺提取的小牛脾提取物，同时还提供了其在原发免疫性血小板减少症（ITP）治疗中的用途，属于生物医药领域。

技术背景：

目前小牛脾提取物已广泛应用于肿瘤的辅助治疗以及免疫系统紊乱所引起的相关疾病如白癜风、荨麻疹和过敏反应等。除此之外，临床上小牛脾提取物还作为原发免疫性血小板减少症（ITP）治疗及辅助治疗剂。

从生物组织中提取多肽、核糖和转移因子等一般采用物理提取法即冻融法、匀浆法和膜过滤法等，如中国发明专利（CN201010257796.0）所公开的方法。现有小牛脾提取物生产工艺提取率低，直接影响产品的收率，而且产品质量难以控制。

本发明采用物理方法结合组合酶协同酶解法提取小牛脾中小分子量的核糖及多肽，并将核糖和多肽比值固定在80-87（μg/mg），在该糖肽比下产品治疗ITP的活性较原工艺提升了近50%，能够在减少病患负担的同时减轻其痛苦。

发明内容：

本发明提供一种新工艺提取的小牛脾提取物，提取物的多肽及核糖含量大大提高。

本发明进一步提供了上述小牛脾提取物在制备治疗原发免疫性血小板减少症方面药物中的用途。

本发明所述的一种小牛脾提取物，是由如下方法制备的；

取乳牛的脾脏，用 0.9％氯化钠溶液清洗，加入 1-1.2 倍量的生理盐水进行匀浆1~5次，胶体磨粒度为 2~8μm ；将匀浆液深度冷冻后40℃解冻，反复5-10次；按物料重量的0.3-1.4%加入组合酶，搅拌均匀；将匀浆液取出放入90℃以下水浴中升温至75℃~80℃；将匀浆液在75℃~80℃保温2-2.5h后迅速降温至10℃~20℃；将上述溶液离心，离心速度为3000-4000 转 / 分，温度 0~10℃，离心 15-30 分钟，收集上清液；调节提取物pH至7.0-7.2；用5000 道尔顿的膜超滤，即得小牛脾提取物；

其中，所述的组合蛋白酶为木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B和5'-磷酸二酯酶混合物，所述组合酶的质量比为：木瓜蛋白酶0.5~1.2份，组织蛋白酶B1.5~2.5份，5'-磷酸二酯酶2.5~4份。

所述的小牛脾提取物在制备升高血小板的药物中的应用。

所述的小牛脾提取物在制备改善造血功能的药物中的应用。

本发明经过实验证明：小牛脾提取物可以治疗原发免疫性血小板减少症并且其活性较专利（CN201010257796.0）所公开的方法增加了近50%，并且进过小牛脾提取物治疗，各个淋巴器官中CD4+CD25+T细胞所占比例与正常组相近。

血小板计数、T淋巴细胞亚群测定(CD4, CD8, CD4/CD8)是评价原发免疫性血小板减少症（ITP）的常规手段，因此发明采用血小板计数以及T淋巴细胞亚群的测定来评价小牛脾提取物对ITP的疗效。

发明的有益效果在于：