[发明专利]一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物SOD冻干粉的制备方法，具体涉及一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法，属于有机合成及应用技术领域。

背景技术

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一类广泛存在于生物体内的金属酶，与铜(Cu)、锌(Zn)、铁(Fe)、锰(Mn)等微量元素(tace elements)代谢有密切关系。SOD是生物体内一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当机体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能，受到国内外学者和研究者的广泛关注，研究领域已涉及到化学、生物学、医学、食品科学和畜牧兽医学等多个学科。因此，深入研究SOD及其与机体内铜、锌、铁、锰等元素代谢的关系，不仅有着重要的理论意义，而且具有重要的实用价值。

目前所用SOD产品多为从人血或动物血液中提取，但随着国际上疯牛病、口啼疫等传染性疾病的蔓延，动物血液中提取的SOD的使用给人们带来了不少的危险因素。因此，从植物、菌类中提取SOD，食用安全性高、资源丰富、价廉，具有广阔的开发前景。

为了提高超氧化物歧化酶的稳定性，应对超氧化物歧化酶分子进行必要的修饰改造。目前对SOD分子进行分子修饰改造的途径包括对SOD氨基酸残基进行化学修饰、用水溶性大分子对SOD氨基酸进行共价修饰、对SOD进行酶切修饰。修饰酶不仅完全保留了天然酶的活性，较天然酶稳定，而且在耐热、耐酸、耐碱和抗胃蛋白酶水解能力等方面明显优于天然酶。CN201010137185.2公开了一种SOD修饰生产工艺，以动物血SOD酶作为修饰对象，采用高纯度月桂酰氯做修饰剂；CN201410062990.1公开了一种月桂酸修饰超氧化歧化酶的方法，其将牛血Cu/Zn—SOD溶于弱碱性缓冲液中，再加入活化后的月桂酸进行修饰。虽然其两个专利用小分子对SOD分子进行修饰，人体的吸收利用率提高，但是产品的稳定性不够高，一定程度上限制了其应用，且存在制备成本较高的问题。赵华的《聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶的初步研究》（现代生物医学进展，2008，8（02）：277-279）中分子量为6000Da的活化聚乙二醇(PEG)为修饰剂，对玉米超氧化物歧化酶(SOD)进行共价修饰，PEG—6000利用氰脲酰氯进行活化，但是该种方法利用在其他植物SOD物中，未必能达到理想效果。

目前，我国热带亚热带地区正大量种植龙舌兰麻，但对其开发利用，主要在于提取纤维以制作缆绳、地毯、麻布等，而龙舌兰麻中宝贵的SOD等生物活性物质则与废液一起弃去，如能从龙舌兰麻中提取高附加值的酶，将大大提高龙舌兰麻的利用率，并降低SOD制备成本。本发明以微波辅助琥珀酸酐和N-羟基琥珀酰亚胺活化单甲氧基聚乙二醇所得单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯为活化修饰剂，以龙舌兰麻超氧化物歧化酶为修饰对象，制备龙舌兰麻超氧化物歧化酶修饰物，开发一种经济有效的稳定性高、应用范围广的植物SOD。

发明内容

本发明的目的是提供一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法，以微波辅助琥珀酸酐（SA）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化单甲氧基聚乙二醇（mPEG）为活化修饰剂，以龙舌兰麻超氧化物歧化酶（SOD）为修饰对象，制备修饰龙舌兰麻SOD修饰物。该活化修饰剂制备方法，利用微波辅助加热，大大缩短活化时间，提高活化效率。该龙舌兰麻SOD利用上述活化修饰剂进行修饰，制备修饰SOD修饰物。

一种单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯的微波辅助合成及用途，包括以下步骤：

A．微波辅助活化单甲氧基聚乙二醇（mPEG）合成活化修饰剂：

将100~120份质量mPEG，3~6份质量SA，80~120份质量DMF混合均匀；将混合物置于微波炉回流装置中，选择功率10~90%，微波辐射3~60分钟，停止辐射；待混合物冷却到室温，搅拌下加入无水乙醚或石油醚，使沉淀完全；抽滤，弃滤液留沉淀；搅拌下向所得沉淀中加入有机溶剂，直到沉淀完全溶解，抽滤，弃沉淀留滤液；在所得滤液中再加入无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤，弃滤液留沉淀；重复上述操作3~5次，得到中间产物I，即单甲氧基聚乙二醇琥珀酸酯（mPEG-S）；所述上述操作是指搅拌下向所得沉淀中加入有机溶剂，直到沉淀完全溶解，抽滤，弃沉淀留滤液；在所得滤液中再加入无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤，弃滤液留沉淀；