[发明专利]一种阳离子抗菌肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种阳离子抗菌肽，其特征在于，在天然发现的抗菌肽序列Lactoferricin B_4-9 （RRWQWR）的基础上，结合虚拟组合库设计技术，设计一组含有5个氨基酸的多肽序列，序列为： SK1：FRWWR-NH₂((Phe-Arg-Trp-Trp-Arg-NH₂)。

2.一种如权利要求1所述阳离子抗菌肽的制备方法，其特征在于，采用固相化学合成法从N末端到C末端合成；具体包括如下步骤：

（1）抗菌肽的制备：

制备从N端到C端逐个进行，由多肽合成仪自动控制；首先称量0.1 mmol的结合了第一个氨基酸即Phe的树脂，装柱，再用20%（v/v）哌啶二甲基甲酰胺溶液脱保护，然后用二甲基甲酰胺清洗，将用9-笏甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸Arg溶解于碳二亚胺(DCC)，并加入羟基苯并三唑(HOBt)/二异丙基乙基胺(DIPEA)，溶解后的溶液在柱上循环偶合反应30 min后，用三氟乙酸(TFA)清洗，并重复以上脱保护到偶合反应步骤直到SK1序列中所有氨基酸均被接入，制备结束，以乙醚将三氟乙酸中的多肽析出，清洗，形成固体粗品抗菌肽；

（2）抗菌肽的纯化：

称量10mg干燥后的固体粗品抗菌肽SK1，溶于10mL 0.1%（v/v）的三氟乙酸(TFA)超纯水溶液中，样品处理后用反相液相色谱(Vydac 218TP1022柱，2.2×25cm)进行纯化，洗脱液：流动相A为0.1%（v/v）的三氟乙酸(TFA)超纯水溶液，流动相B为0.1%（v/v）的乙腈(ACN)超纯水溶液；洗脱梯度为：A相：5%~30%（v/v）；流速15 mL/min，检测波长220nm，进样体积为4 mL，收集洗脱峰；并将反相液相色谱(RP-HPLC)纯化出来的目标峰放置冻干机中，在-50℃冻干后，再用质谱确认正确与否，HPLC检测纯度。

3.如权利要求1所述阳离子抗菌肽在制备治疗细菌感染疾病药物中的应用。

4.如权利要求1所述阳离子抗菌肽在制备治疗革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌疾病药物中的应用。