[发明专利]基于附睾管腔内环境实验的微灌注方法及其装置

说明书

技术领域

    本发明属于附睾管腔内环境实验领域，具体涉及一种基于附睾管腔内环境实验的微灌注方法及其装置。

背景技术

目前，国内对于雄性动物生殖系统附睾功能的研究大多在组织取材、细胞培养等离体状态下研究，而关于活体环境下的研究鲜有报道，国际上只有少数的研究小组采用活体环境下微灌注法进行附睾相关功能的研究。他们从附睾尾部分离附睾管作切口并插管，橡皮泥固定，然后在输精管近端作另一开口并插管，用倒灌注法向附睾尾部注入不同物质，研究附睾功能的变化。但我们在实施过程中发现存在以下问题：1. 实验操作难度大，因附睾管管径细，管壁薄，操作稍不熟练就会将附睾管牵拉断，即使不断，由于附睾管内充满了精液，在做切口后精液不断涌出，影响插管；2. 对器械、材料要求极高，插管所用的直径200 μm PVC管在国内没有销售，国产的剪刀镊子、橡皮泥以及固定输精管插管的结扎线都很难满足操作要求。3. 在行输精管插管时，一个关键性操作就是需分离伴行血管，但伴行血管很细，分支较多且与输精管共用一层筋膜，两者之间间隙微小，分离较为困难，很容易损伤血管，一旦出血，将影响实验操作；4. 在输精管插管固定时，其对结扎线粗细、材质都有较高要求，使用国产结扎线很容易导致插管滑脱，或结扎线切割输精管管壁。因此，要成功将此方案用于实验，操作者需花费很多的时间和精力来练习和选择材料，投入使用周期较长。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于附睾管腔内环境实验的微灌注方法及其装置，解决现有技术中附睾管和输精管插管难、固定难的问题。

本发明所采用的技术方案是：

基于附睾管腔内环境实验的微灌注方法，其特征在于：

由以下步骤实现：

步骤一：对大鼠进行腹腔麻醉，在阴囊正中旁切口暴露附睾；

步骤二：解剖显微镜下，在附睾尾部用精细镊去除1mm²的结缔组织，游离环状盘旋的附睾管；

步骤三：取玻璃材质的微灌注管，内径0.5 mm，外径0.8 mm，头部由拉管仪拉成细针头，针头尖端外径小于0.2 mm，微灌注管尾部连接内径为0.8 mm的硅胶管，硅胶管另一端连接1 ml的注射器，注射器连接微量注射泵；

步骤四：将微灌注管头部的针头插入附睾管，在插管位置点覆组织胶固定微灌注管，微量注射泵以1-2μl/min的速度注入干预物质；

步骤五：30 min后在输精管近端用外径300μm的硅胶管插管，在插管位置点覆组织胶固定插管；

步骤六：将附睾管从注射部位开一小口，微量注射泵以45μl/min的速度用PBS倒冲法从输精管将附睾尾部的附睾液冲出并收集。

所述的基于附睾管腔内环境实验的微灌注方法中使用的微灌注装置，其特征在于：

设置有玻璃材质的微灌注管，内径为0.5mm，外径为0.8mm；

所述微灌注管头部由拉管仪拉成细针头，针头尖端外径小于0.2 mm；

所述微灌注管尾部连接有内径为0.8mm的硅胶管。

所述微灌注管插管位置点覆组织胶。

所述硅胶管另一端连接1ml的注射器，注射器连接微量注射泵。

本发明具有以下优点：

1、材料易得：

一般的毛细玻璃管即可满足，将内径为0.5 mm，外径为0.8 mm的毛细玻璃管一端在拉管仪上拉成较细的针；固定插管的组织胶一般的外科手术用胶即可。解决了国外常用的固定附睾管插管的橡皮泥难购买、国产的橡皮泥又达不到要求的问题，同时也解决了国产结扎线难以固定输精管插管的问题。

2、操作简单：

一方面，相比于国外用的PVC管，此灌注针尖端较硬，不用在附睾管上做切口，可直接插管，从而避免了做切口时精液溢出以及PVC管较软难操作的问题。另一方面，选用组织胶固定插管，简单易行，在插管处滴几滴组织胶，瞬间即可将插管和组织固定住，既避免了橡皮泥固定附睾管插管外力过大将附睾管封闭的情况，又避免了用结扎线固定时切割输精管以及插管滑脱的可能。另外也不用分离输精管伴行的血管，直接在输精管处做一切口，避免分离不当血管破裂造成的操作影响。 

附图说明

图1为微灌注装置结构图。

图中，1-微灌注管，2-针头，3-组织胶，4-硅胶管。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。