[发明专利]一种人体外胎盘小叶灌流模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗模型技术领域，具体涉及一种人体外胎盘小叶灌流模型的建立方法。

背景技术

胎盘由胎儿部分的叶状绒毛膜和羊膜以及母体部分的底蜕膜共同构成。胎盘是母体循环和胎儿循环的分隔，让胎儿处于一个相对稳定且不易受外界环境影响的状态，故又称之为胎盘屏障。胎盘屏障能进行母胎间的物质交换，在为胎儿提供养分的同时排出胎儿的代谢产物。因此对胎盘屏障透过性的研究，不仅能了解外界因素对胎儿宫内生长发育的影响，还能对研究一些妊娠期特有疾病的发生发展过程有一定的指导意义。

由于动物种属间胎盘形态学和功能的差异使得动物实验得出的结论缺乏可信度，而进行人体实验又受到医学伦理学的限制，所以对人胎盘透过性的研究主要集中在建立人胎盘屏障的体外模型上。人类胎盘体外循环灌注模型是将刚分娩出的胎盘进行小叶分离、灌注，建立母体面和胎儿面的双向循环，在体外模拟人体胎盘屏障，为原来无法在妊娠期妇女体内完成的胎盘透过性研究提供了一种可行的途径。

如文献“人类胎盘体外循环灌注模型的建立”（《中国药理学与毒理学杂志》，2013 年12 月第27 卷第6 期），公开了一种人类胎盘体外循环灌注模型。通过在体外模拟子宫环境，以安替比林为参照物，选用自然分娩或剖宫产刚娩出的健康、完整、足月的人类胎盘，在其胎儿面选择供应同一胎盘小叶的一对脐动静脉，穿刺插管后建立单个胎盘小叶的胎儿循环。该文献中所报道的方法将胎盘予以冷冻保存，以致在循环建立时，因胎盘子面细小血管中有大量血栓形成而大大降低模型建立的成功率；同时，胎盘被冷冻后，其细胞活性会受到不同程度的影响，直接影响实验结果。此外，胎盘的物质转运功能并非单纯的简单扩散，还需维持内皮细胞的生物活性，但在该文献所公开的灌注液配比中，并没有加入维持细胞活性的物质，使得实验结果的可靠性存疑。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种人体外胎盘小叶灌流模型的建立方法。本发明的模型建立方法所需设备简单、操作可控性好、稳定性佳，最大程度还原了胎盘屏障体内转运过程。

为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：

一种人体外胎盘小叶灌流模型的建立方法，其特征在于：在37℃恒温下，先对胎盘子面的脐动静脉进行插管，并注入37℃的溶有肝素钠的生理盐水后，再将此脐动静脉干所辐射区的胎盘小叶取下；在母体面将导管插入绒毛间隙，将插管完毕的胎盘小叶用无菌漏斗置于恒温水浴箱中，并固定漏斗，样品固定后即在母体面及胎儿面分别加注灌流液。

本发明的建模方法有以下优点：（1）可以避免在建立胎盘循环时，由于胎盘子面血管内形成过多的血栓而导致模型失败；（2）在灌流过程中母面的灌注压力来自于两方面，第一即为蠕动泵给予的灌注压力，第二为循环池中灌流液体给予的压力，将胎盘小叶取下，而非保留胎盘小叶于胎盘中，可以大大缩减循环池中的液体量，有效降低循环建立所需要的灌流液的量，大大缩减灌流所需成本。

注入37℃的溶有肝素钠的生理盐水的主要作用是抗凝，避免血管内血栓形成而导致模型失败，37℃是体内各项生化反应的最适温度。

所述取下的胎盘小叶大小为4~6 cm，在该小叶最边缘血管外留1~2cm宽的边缘，以防止灌流时液体从侧边漏出。

本发明所述的灌流液为KRB干粉（Krebs-Ringer bicarbonate buffer，克雷布斯-林格氏重碳酸盐干粉）配液，辅料为葡萄糖、右旋糖酐T40和肝素钠。

胎盘屏障的转运功能并不仅仅依靠物质的简单扩散，还需保持细胞的生物活性，本发明的灌流液中加入维持细胞活性的右旋糖酐T40，能更真实的反应出体内胎盘屏障的物质转运过程。

优选地，所述的灌流液中，右旋糖酐T40在胎儿面的浓度为30g/L，母体面的浓度为8.4g/L，能最大程度保持细胞活性。

优选地，灌流液的pH值为7.3~7.5，配制后于37 ℃水浴箱预热，并在灌流过程中保持此温度。

所述的母体面灌流液中充入含95%氧气和5%二氧化碳的混合气体。正常情况下人体内动脉血的血氧饱和度不低于90%，适宜的氧饱和度可以保证胎盘屏障细胞的活性，真实地模拟体内环境。

所述的胎儿面灌流液中充入含95%氮气和5%二氧化碳的混合气体。            在体内胎儿面处于封闭的羊膜腔内，与外界不相通，除通过胎盘屏障简单扩散来的氧气外，没有其他获得氧气的途径，此处充入惰性气体氮气也是为了真实地模拟体内环境。