[发明专利]一种基于LAMP技术对多菌灵高抗灰葡萄孢菌株的快速检测方法

权利要求书

1.一种基于LAMP技术快速检测灰葡萄孢菌对多菌灵高抗菌株的分子生物学方法，该方法共分三步：

(1)运用两对特异性引物对待测样品的基因组DNA进行LAMP恒温扩增，其中所述的两对特异性引物的碱基序列分别是：

LAMP反应所用的外引物对：

F3：5’-GCAACTCTCTCTGTCCATCAA-3’

B3：5’-GCCAACTTTCGGAGATCTGA-3’

LAMP反应所用的内引物对：

FIP：5’-GGTTGCTGAGCTTCAAGGTTCTCAGGTTGAGAACTCTGACAYGAC-3’

BIP：5’-TCTTAACCACTTGGTTTCCGCCGAAGTTGACCAGGGAAACGG-3’

反应体系：

反应参数：

62℃60min，80℃10min；

(2)对上述LAMP扩增产物观察其颜色变化，并在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果；

(3)鉴定是否为灰葡萄孢菌对多菌灵高抗菌株；LAMP扩增产物显示天蓝色，电泳图谱应为梯状条带，判定为灰葡萄孢菌对多菌灵的高抗菌株；扩增产物为紫色，电泳图谱无条带扩增，判定为灰葡萄孢菌对多菌灵的非高抗菌株。