[发明专利]一种灯盏花糖基转移酶、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种来自于灯盏花，具有在黄酮化合物或类黄酮7位羟基上转移糖功能的多肽及其制备和应用。

背景技术

灯盏花[Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]是云南重点开发的“五大天然系列”药物之一。灯盏花最早记载于明代的《滇南本草》，是云南苗族的传统药用植物，其药性味辛、微苦，温，归心、肝经，具有祛风散寒，活血通络止痛等功效，用于风寒湿痹痛，中风瘫痪，胸痹心痛，牙痛，感冒等疾病。灯盏花为菊科飞蓬属多年生植物，以其总黄酮及其灯盏乙素(黄酮)、咖啡酰奎宁酸类化合物为活性成分开发有4个注射液品种，成为云南省最具发展潜力的药用植物之一。其中灯盏乙素具有抗凝血、抗血栓形成，改善血液流变性及微循环，增加脑血流量，抗心肌缺血，提高机体耐缺氧能力等作用，临床上用于治疗脑供血不足、脑出血所致后遗症、高粘脂血症、脑血栓、冠心病、心绞痛等疾病。灯盏乙素的合成途径目前尚不清晰，但是其C7位的糖基化对其生物合成具有重要意义。

虽然目前已经克隆得到一些植物黄酮类的糖基化基因，虽然能够对黄酮类化合物进行糖基化，但其糖基化位置往往没有专一性。如来源于蜡状芽孢杆菌的糖基转移酶，以UDP-葡萄糖为糖基供体，以木犀草素或芹菜素为糖基受体，在7位或4’位的羟基上进行随机的糖基化；又如来源于拟南芥的尿苷二磷酸葡萄糖糖基转移酶(UGT)可对槲皮素进行糖基化，但是糖基化可发生在槲皮素3位、7位、3’位和4’位，得到6种不同的糖基化产物(存在两种双位糖基化产物)。这些糖基化位置不可控的反应往往实际用途不大，能够催化底物在专一位点进行糖基化的糖基转移酶更具应用价值。

来源于不同物种的糖基化酶在蛋白质一级结构上差别很大，未知糖基化酶分离鉴定困难。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种具有在黄酮化合物或类黄酮7位羟基上转移糖功能的多肽，选自以下(a)～(c)所述的多肽:

(a)、由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的多肽；

(b)、由(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有在黄酮化合物或类黄酮7位羟基上转移糖功能的由(a)衍生的多肽；

(c)、与(a)中的氨基酸序列有95％以上同一性的氨基酸序列，且具有在黄酮化合物或类黄酮7位羟基上转移糖功能的多肽。

将本发明中，具有在黄酮化合物或类黄酮7位羟基上转移糖功能的多肽，命名为F7GAT多肽，包括由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的多肽，还包括如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽基础上的保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。

所述“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明F7GAT多肽相同的生物学功能或活性的多肽。

它们可以是以下(1)～(4)中任一种多肽：

(1)其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基取代；优选的是保守氨基酸残基；

(2)其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代；

(3)其中SEQ ID NO：2所示的多肽与另一种化合物融合，进一步，所述化合物为延长多肽半衰期的化合物，更进一步，如聚乙二醇；

(4)其中附加的氨基酸序列融合进SEQ ID NO：2所示的多肽而形成的多肽序列，进一步所述附加的氨基酸序列为前导序列或分泌序列或用来纯化次多肽的序列或蛋白原序列。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选为重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主，如细菌、酵母、高等植物、昆虫或哺乳动物细胞中产生。根据重组生产方案所使用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明的另一目的在于提供一种多核苷酸，选自如下(e)～(h)：

(e)、编码F7GAT多肽的多核苷酸；优选地，为编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成多肽的多核苷酸；更优选地，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1中所示序列或如SEQ ID NO.1中4-1419位所示序列。

(f)、编码F7GAT多肽的片段、类似物或衍生物的多核苷酸；