[发明专利]表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组猪痘病毒载体疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物制品领域，涉及一种重组猪痘病毒载体疫苗。

背景技术

猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）可引起猪发生猪圆环病毒病（PCVD），猪圆环病毒病在临床上有多种表现形式，如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、仔猪先天性震颤及母猪繁殖障碍等疾病。目前，PCVD在我国流行范围很广泛，给养猪业造成较大的经济损失。猪圆环病毒2型（PCV2）基因组大小为1767bp或1768bp。对其基因组分析得出有200bp以上大小的ORF有11个，编码蛋白分子量在2～36KDa之间；ORF1为PCV2最大的阅读框，共有945个碱基，位于病毒的正股DNA上，编码病毒复制相关蛋白（Rep蛋白）和截短的Rep′蛋白：Rep蛋白有312aa，分子量约为35.8KDa，与病毒基因组的滚环复制有关；Rep′蛋白有168aa，分子量约为19KDa。Rep蛋白与Rep′蛋白的正常表达，病毒才能启动正常复制。ORF2为PCV2病毒第二大阅读框，共有702或705个碱基，编码病毒的核衣壳蛋白。衣壳蛋白分子量约为27.8KDa，是PCV2的主要免疫原性蛋白，所以在疾病诊断和疫苗研究起着重要作用，目前针对PCV2疫苗的研究主要集中在衣壳蛋白。目前，已有多种利用PCV2的衣壳蛋白编码基因构建用于预防猪圆环病毒的疫苗，如杆状病毒、原核表达质粒、乳酸链球菌等。

痘病毒载体作为基因工程中的重要工具，其应用极其广泛，已成功地表达了来源于植物、动物，乃至人类的很多基因。作为病毒疫苗载体，痘病毒具有以下优点：（1）便于操作和使用；（2）痘病毒的基因组大，容易组装，可以容纳超过25 kb的外源DNA；（3）痘病毒载体的外源基因表达产物能诱导抗外来抗原的抗体和细胞毒性T细胞反应，接种一次就能获得长期的免疫效果；（4）痘病毒具有严格的宿主特异性，病毒本身不会对免疫接种的动物造成疾病；（5）能够正确的表达目的蛋白，保证蛋白的真实性。因此痘病毒具有潜力成为安全有效的疫苗载体。目前，常用的重组痘病毒表达载体主要有：痘苗病毒（VV）、禽痘病毒、山羊痘病毒等。迄今未见以猪痘病毒SPV017～SPV020为缺失位点构建表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组猪痘病毒的报道。

目前已报道关于猪痘病毒作为表达载体表达外源基因的插入位点有3个，分别是SPV063（TK基因）、SPV043和SPV020～SPV021间非编码区。例如以猪痘病毒（SWPV）为载体，以SPV063（TK基因）作为外源基因插入和缺失位点，表达猪瘟病毒E2蛋白；以猪痘病毒SPV043作为插入位点表达猫白血病病毒Gag和Env基因；以猪痘病毒SPV020～SPV021间非编码区为插入位点表达圆环病毒2型ORF2基因。但以猪痘病毒SPV017～SPV020作为缺失位点构建的重组猪痘病毒载体疫苗乃本发明人独创。

本发明人经过大量实验成功构建了以猪痘病毒SPV017～SPV020为缺失位点表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗。在实验过程中发现，由于SPV017～SPV020缺失不影响病毒增殖，产生的重组病毒滴度比其他缺失位点（比如SPV020～SPV021间非编码区、SPV043、SPV063）显著要高，能在免疫动物体内进行有效的增殖，免疫后产生的抗体效价明显高于其他缺失位点。因而以其作为载体构建的疫苗相对于其他载体或其他缺失位点取得了更好的免疫效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够有效预防猪圆环病毒病的重组猪痘病毒载体疫苗及其制备方法。

本发明提供了一种重组猪痘病毒（rSWE11/P28C），该重组猪痘病毒是在猪痘病毒载体SPV017～SPV020缺失位点插入本发明所述的ORF2基因重组制备而成。

在本发明的技术方案中，本发明所述的ORF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明通过动物免疫试验发现：本发明提供的重组猪痘病毒能够在免疫动物体内表达目的蛋白（PCV2衣壳蛋白），能够诱导动物体内产生较高效价的抗体，并对免疫动物产生良好的保护作用。

本发明提供了一个表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组疫苗，该重组疫苗包含猪痘病毒载体和本发明提供的ORF2基因。

在本发明的技术方案中，所述的猪痘病毒载体为pSWE11，该载体是以猪痘病毒SPV017～SPV020作为缺失位点插入外源基因。