[发明专利]分泌抗小西葫芦黄化花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗小西葫芦黄化花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

 小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）是危害葫芦科植物的主要病毒之一，最早由Lisa于1973年在意大利北部的小西葫芦上发现，此后，世界各地均相继报道了这种病毒。我国在1991年首次发现了ZYMV新疆分离物。至今，ZYMV已成为一种全球性的作物病毒，主要分布于温带、亚热带和热带地区，曾在意大利和法国的西葫芦上造成毁灭性的灾害。ZYMV能侵染葫芦科(Cucuribitaceae)、苋科(Amarantaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Compositae)、豆科(Leguminosae)、毛茛科(Ranunculaceae)等11科植物。感病植株种子发芽率低，产量大幅度下降。在小西葫芦子叶期人工接种ZYMV，植株出现严重畸形，不能形成果实。而据国外报道，接种病毒的黄瓜产量下降64%-85%，95%的感病黄瓜无法进入市场。无论是在高度机械化农业耕作区还是传统农业耕作区，ZYMV都会导致农作物严重减产，造成巨大的经济损失。

ZYMV为马铃薯Y病毒属成员，病毒为弯曲的线状粒子，无包膜，典型的病毒粒子长度为750nm，宽11nm，无包膜。病毒粒子由4.5%~7%的核酸与93%~95.5%的蛋白质组成，含一分子线状+ssRNA，基因组大小为9.6kb。病毒粒子的致死温度为55~60℃,稀释限点为10^-4~10^-5，室温下可体外存活3~5天。该病毒可由多种蚜虫以非持久性方式传播，也可以进行汁液摩擦传播，还可以由种子传播，只是种子的传毒力较低。

ZYMV能侵染葫芦科(Cucuribitaceae)、苋科(Amarantaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Compositae)、豆科(Leguminosae)、毛茛科(Ranunculaceae)等11科植物。在自然条件下，感病作物的症状一般都比较严重，表现为系统花叶和大黄斑，叶片、果实不同程度的畸形，果肉僵硬且味苦涩，种子发芽率低。其中在小西葫芦上主要表现为严重系统花叶，果实畸形，表面有块状突出，甜瓜、南瓜上产生大黄斑，严重系统花叶，果实明显呈畸形。黄瓜表现为典型花叶、斑驳等。西瓜上形成褪绿斑、系统花叶，不规则的果色、形状变化等。同时，感病作物的产量大幅度降低。

目前，全球气候呈现转暖趋势，有利于以蚜虫作为自然传播媒介的ZYMV的流行与危害。一方面，气候变暖使ZYMV本身的变异率增高；其次，ZYMV的传毒蚜虫在较高温度下发育加快，增长能力提高，给病毒的快速传播创造了条件。我国的大棚栽培相当普遍，病毒及其传毒蚜虫在棚内顺利越冬后，早春即散布于棚外进行大量复制和繁殖，从而导致病害的提前发生和生长季节早期病毒累积量偏高，形成恶性循环。

针对小西葫芦黄化花叶病毒单克隆抗体的制备展开工作。当前小西葫芦黄化花叶病毒病的预警和监测体系尚不完善，甚至很多主要流行区并未进行相关预测和防控工作。另外，目前仅用田间观测、RT-PCR检测、电镜观察等方法来检测该病毒，这几种方法效率低，并不适合大批量样品检测。而血清学的方法操作简单，特异性好，且可以同时处理大量样品，但必须依赖于特异性的病毒单抗。因此，利用杂交瘤技术制备了1株能分泌抗ZYMV单抗的杂交瘤细胞16H11，并用其分泌的单抗建立了检测该病毒的血清学方法和检测试剂盒，从而为我国小西葫芦黄化花叶病毒病的早期监测和预警，科学指导防控提供物质和技术支持。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗小西葫芦黄化花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

分泌抗小西葫芦黄化花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株16H11，它能分泌抗小西葫芦黄化花叶病毒的特异性单克隆抗体, 杂交瘤细胞株16H11于2014年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏号为CGMCC No.9341，分类命名为：分泌抗小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)单抗杂交瘤细胞。

抗小西葫芦黄化花叶病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与小西葫芦黄化花叶病毒的衣壳蛋白有特异性免疫结合反应，能用于传毒介体蚜虫体内小西葫芦黄化花叶病毒的检测。