[发明专利]一种提高丝状真菌纤维素酶产量和木质纤维素降解利用的菌株构建方法及应用

权利要求书

1.用于生产纤维素酶或将生物质降解转化为糖或其他化学品的多基因突变菌株，其特征在于，含有敲除、突变或弱化表达clp1(ncu05853)基因，能够在纤维二糖以及纤维素诱导条件下高产纤维素酶系，以及生物质降解能力得到提升；为以下菌株之一：

a.命名为CPL7(Δ3βGΔcdt2Δncu05853)的基因突变菌株，构建部分碱基突变或敲除或减弱纤维寡糖转运类似蛋白NCU05853和纤维寡糖转运蛋白CDT-2（NCU08114）以及β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755的微生物菌株；

b.命名为CPL9(Δ3βGΔcdt2Δncu05853Δcre1)，构建部分碱基突变或敲除或减弱纤维寡糖转运类似蛋白NCU05853和纤维寡糖转运蛋白CDT-2（NCU08114）和β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755以及碳分解代谢物阻遏蛋白CRE-1（NCU08807）的微生物菌株；

c.命名为CPL10(Δ2βGΔcdt2Δncu05853)，构建部分碱基突变或敲除或减弱纤维寡糖转运类似蛋白NCU05853和纤维寡糖转运蛋白CDT-2（NCU08114）以及β-葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU08755的微生物菌株；

d.命名为CPL11(Δ2βGΔcdt2Δncu05853Δcre1)，构建部分碱基突变或敲除或减弱纤维寡糖感应蛋白NCU05853和纤维寡糖转运蛋白CDT-2（NCU08114）和β-葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU08755以及碳分解代谢物阻遏蛋白CRE-1（NCU08807）的微生物菌株；

所述纤维寡糖转运类似蛋白CLP1(NCU05853)和纤维寡糖转运蛋白CDT-2（NCU08114）以及β-葡萄糖苷酶基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸残基序列如下：1）纤维寡糖转运类似蛋白CLP1(NCU05853)的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示；NCU05853编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.2所示；2）纤维寡糖转运蛋白NCU08114的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.3所示；纤维寡糖转运蛋白NCU08114编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.4所示；3）β-葡萄糖苷酶基因NCU00130的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.5所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU00130编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.6所示；4）β-葡萄糖苷酶基因NCU04952的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.7所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU04952编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.8所示；5）β-葡萄糖苷酶基因NCU08755的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.9所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU08755编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.10所示；6）碳分解代谢物阻遏蛋白CRE-1（NCU08807）的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.11所示；碳分解代谢物阻遏蛋白CRE-1（NCU08807）编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQIDNO.12所示。

2.一种利用组合敲除CLP1(NCU05853)以及其他基因(包括纤维寡糖转运蛋白CDT1或CDT2;葡萄糖苷酶基因(一个或多个葡萄糖苷酶基因:NCU00130,NCU04952,NCU08755,NCU03641,NCU08054,NCU07487,NCU05577)和碳分解代谢物阻遏蛋白CRE-1（NCU08807）中的不同组合.获得及促进微生物纤维素酶系分泌能力,获得或促进微生物水解生物质纤维素或半纤维素的方法，可将纤维素水解为纤维寡糖,将半纤维素水解为木寡糖木糖阿拉伯糖等，得到的重组微生物菌株与出发菌株相比，重组菌株获得或提高纤维素酶分泌能力及生物质水解能力。

3.以权利要求1或2提及的多基因突变菌株Δ3βGΔcdt2Δncu05853，Δ2βGΔcdt2Δncu05853，Δ3βGΔcdt2Δncu05853Δcre1，Δ2βGΔcdt2Δncu05853Δcre1为基础菌，继续改造（敲除或突变等）其它基因，得到的用于生产纤维素酶的工程菌。

4.一种使微生物获得或提高生物质转化为化学品的方法，是利用权利要求1-3中所述组合突变体,获得或提高微生物将生物质降解后进一步将降解物(多种碳水化合物)转化为有机酸等化学品的方法。