[发明专利]一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法

权利要求书

1.一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法，包括下述的步骤：

（1）原料预处理

a.菜籽饼粕用粉碎机粉碎至40 目，装萃取釜，所述的菜籽饼粕是牡丹籽仁初榨后剩下的残留粕渣；

b. 用食品级CO2，其纯度为99.99%，流量为12L/ 小时，设定萃取压力为20MPa、温

度为25℃，分离条件是：分离器Ⅰ压力10KPa、温度50℃，分离器Ⅱ压力4KPa、温度40℃，萃取时间0.5 小时；

c. 提取完毕，收集萃取物，得到牡丹籽油；

d. 取步骤c 中剩下的残渣脱水处理至其水分含量为20%，得菜籽饼粕；

将步骤d中的菜籽饼粕经烘干至其水分含量为2-4%，再粉碎至80-200目；

（2）酶解

将粉碎后的菜籽饼粕，加水混匀，菜籽饼粕与水的重量比例为1：6-12，并加入脂肪酶，脂肪酶的添加量0.3-0.5％，酶解温度45℃，调pH 5.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；

再加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.4-0.6％、酶解温度40℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；

再加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶的添加量为0.5-1.2%，木瓜蛋白酶的添加量为0.3-0.6%，酶解温度为45℃，pH值5.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min；

（3）非水溶性多糖转化

淀粉酶的添加量为0.8-1.2％、酶解温度40℃、pH值5，酶解1.5-2.0h后，100-105℃灭酶5-10min；将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min；

（4）离心分离

将酶解后的菜籽饼粕，离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；

（5）可溶性多糖的提取

取步骤（4）中的上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70℃下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖； 

上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的菜籽饼粕的重量百分比。

2.如权利要求1所述一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法，其特征在于，所述的脂肪酶的用量为0.4%。

3.如权利要求1所述的一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法，其特征在于，所述的纤维素酶的用量是0.5%。

4.如权利要求1所述的一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法，其特征在于，所述的淀粉酶的添加量为1.0%。

5.如权利要求1-4中任一项所述的一种生物酶法从菜籽饼粕中提取菜籽多糖的方法，其特征在于，所述的方法包括下述的步骤：

（1）原料预处理

菜籽饼粕用粉碎机粉碎至40 目，装萃取釜，所述的菜籽饼粕是牡丹籽仁初榨后剩下的残留粕渣；

b. 用食品级CO2，其纯度为99.99%，流量为12L/ 小时，设定萃取压力为20MPa、温

度为25℃，分离条件是：分离器Ⅰ压力10KPa、温度50℃，分离器Ⅱ压力4KPa、温度40℃，萃取时间0.5 小时；

c. 提取完毕，收集萃取物，得到牡丹籽油；

d. 取步骤c 中剩下的残渣脱水处理至其水分含量为20%，得菜籽饼粕；

将步骤d中的菜籽饼粕经烘干至其水分含量为2-4%，再粉碎至80-200目；

（2）酶解

将粉碎后的菜籽饼粕，加水混匀，菜籽饼粕与水的重量比例为1：8，并加入脂肪酶，脂肪酶的添加量0.4％，酶解温度45℃，调pH 5.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.2h；

再加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5％、酶解温度40℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.2h；

再加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶的添加量为0.8%，木瓜蛋白酶的添加量为0.5%，酶解温度为45℃，pH值5.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.2h，酶解后在100℃下灭酶8min；

（3）非水溶性多糖转化

淀粉酶的添加量为1％、酶解温度40℃、pH值5，酶解1.8h后，100℃灭酶6min；

（4）离心分离

将酶解后的菜籽饼粕，离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；

（5）可溶性多糖的提取

取步骤（4）中的上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置15小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖； 

上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的菜籽饼粕的重量百分比。