[发明专利]分泌抗西瓜花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗西瓜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus, WMV）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）重要成员，由蚜虫进行非持久性传播。WMV分布于全世界各地，主要集中于温带和地中海地区。1954年，美国的Anderson等人首次在Florida的西瓜上发现了该病毒。1965年，R.E.Webb和H.A.Scot在西瓜上最早分离得到了两种危害西瓜的病毒，并根据寄主范围的差异和交互保护作用的有无将其分为两株系，分别命名为WMV-1和WMV-2。后来，Purcifull在研究中发现，WMV-1实际上是PRSV的一个株系，在西瓜上大量发生并广泛分布于世界的病毒是WMV-2，此名称也被沿用至今，现在将其称为WMV。

WMV在国内广泛发生，在陕西、山东、云南、辽宁、山西、新疆、河南和黑龙江等地均获得了不同的分离物。自然条件下，WMV可侵染葫芦科、藜科、豆科等27科170多种植物，并常与番木瓜环斑病毒西瓜株系（Papaya ringspot virus, PRSV-W）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）、小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV）、南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus, SqMV）、南瓜曲叶病毒（Squash leaf curlvirus, SLCV）和莴苣侵染性黄化病毒（Lettuce infection yellow virus, LIYV）、烟草环斑病毒（Tobacco ringspot virus, TRSV）、番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus, TSWV）等病毒复合侵染。

WMV病毒粒子具有典型的Potyvirus属病毒形态，病毒粒子外无包膜，呈线状，大多弯曲，长730-765nm，直径11-13nm。病毒粒子中5%的成分为核酸，粒子包含1分子线状单链RNA，长约10kb。病毒粒子中95%的成分为蛋白质，1个结构蛋白，9个非结构蛋白。病毒粒子在CsCl中的浮力密度是1.32 g.cm^-3，沉降系数为150S，病毒汁液的稀释限点为10^-3-10^-5，钝化温度为55-65℃，体外存活期为6-18天。

该病毒粒子主要存在于表皮和叶肉细胞的细胞质中，内含体通常以一定的形状存在于受侵染的细胞中，一般以卷筒状和片层状聚集在细胞质和细胞核中。它们中有些包含有病毒粒子，有些没有病毒粒子。WMV在世界范围内广泛发生，不同地区针对不同的分离物分别进行了不同的生理学和病理学的研究，并对病毒侵染寄主后引起的结构学变化进行了超微观察，发现受WMV侵染的植株细胞膜受到严重的破坏，细胞质外渗，电导率值增加，并且叶绿体、线粒体的膜结构明显受损。这一系列的指标说明寄主在受WMV侵染后，寄主的部分细胞器受到病毒的危害，尤其是叶绿体，由于基粒片层的崩解，叶绿素大量解体，使得寄主组织出现褪绿的现象。

WMV在田间主要由蚜虫以非持久方式传播，Edwardson和Christie研究发现至少有29种蚜虫能够传播该病毒，如桃蚜（Myzus persicae）、棉蚜（Aphis gossypii）、麦二叉蚜（Schizaphis graminum）、苜蓿蚜（A. medicagenis）和麦长管蚜（Macrosiphum avenae）等。另外，WMV也可通过汁液机械方式和种子传播。

由于WMV在许多国家中试瓜类一类重要的病毒株系，因此在寻找抗源方面做了较多的研究工作。如在甜瓜上，Sowell和Demski用PI 180280，633-3，PI 180283，PI 403994，Criollo和Hales Best等4个品系2个品种对WMV-1和WMV-2的抗性进行研究，结果发现PI 180280，633-3，PI 180283都对WMV-1具有抗性，但都感WMV-2，而PI 403994感WMV-1但抗WMV-2.。又如在西瓜上，Provvidenti研究来自Nigeria的Citrullus colocynthis，发现PI 494528，PI 494532对WMV-2具有一定的抗性，并且该野生种与一些西瓜栽培种具有很强的亲和性，已被利用于抗病毒育种。