[发明专利]一种特异性标记根毛微丝的Marker

权利要求书

1.一种特异性标记根毛微丝的Marker，其特征在于：所述的Marker为能够在根毛中特异性表达的质粒ProE7：mRFP-mTalin ProE7：mRFP-mTalin是以pB7WG2.0为骨架载体，将pB7WG2.0的35S替换为ProE7，GW替换为mRFP-mTalin。

2.根据权利要求1所述的特异性标记根毛微丝的Marker，其特征在于：ProE7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；mRFP-mTalin的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述的特异性标记根毛微丝的Marker的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)克隆目的基因mRFP-mTalin：

1)以质粒PKU83为模板，用引物1a和引物2a进行PCR扩增得到目的基因mRFP，

引物1a为：CACCATGGCCTCCTCCGAGGAC，

引物2a为：GGCGCCGGTGGAGTG；

2)以小鼠基因mTalin的cDNA为模板，用引物1b和引物2b进行PCR扩增得到目的基因mTalin，

引物1b为：CACTCCACCGGCGCCGGATCCATCCTAGAAGCTGCCAAGTCC，

引物2b为：TTAGTGCTCGTCTCGAAGCTC；

3)以mRFP和mTalin为模板，用引物1和引物2进行PCR扩增得到目的基因mRFP-mTalin，

引物1为：CACCATGGCCTCCTCCGAGGAC，

引物2为：TTAGTGCTCGTCTCGAAGCTCT；

(2)将目的基因mRFP-mTalin通过TOPO反应连入pENTR载体，构建克隆载体mRFP-mTalin；

(3)克隆目的基因ProE7：以拟南芥根的cNDA为模板，用引物3和引物4进行PCR扩增得到目的基因ProE7；

引物3为：ATAAGCTTAGAGAGCGCCCGGTTT，

引物4为：atACTAGTcTAGCCTCTTTTTCTTTATTCTTAGG；

(4)将目的基因ProE7通过TA连接连入pMD19-T，构建克隆载体ProE7；

(5)分别将克隆载体ProE7和质粒pB7WG2.0用限制性内切酶HindIII和SpeI进行双酶切，将酶切的ProE7片段和pB7WG2.0骨架连接构建目的载体ProE7：GW；

(6)利用克隆载体mRFP-mTalin和目的载体ProE7：GW通过LR反应，构建表达载体ProE7：mRFP-mTalin，即特异性标记根毛微丝的Marker。

4.权利要求1或2所述的特异性标记根毛微丝的Marker在研究植物根毛中微丝的功能中的应用。