[发明专利]一种三肽囊素衍生物的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽药学合成领域，尤其涉及一种三肽囊素衍生物的生产方法。

背景技术

法氏囊是家禽体内的中枢免疫器官，在免疫反应中发挥着重要的作用，三肽囊素是法氏 囊具有免疫功能的主要活性因子，Glick等报道用三肽囊素去注射去除法氏囊的仔鸡，可使 其回复产生抗体的能力。注射三肽囊素均可显著提高家禽的成活率。目前国内关于三肽囊素 的研究已经进入到规模化阶段。但是仍存在成本过高，产品重复性较差等问题，远远无法满 足市场上对三肽囊素的需要，所以，怎么样更高效更节约的生产是一个需要攻克的课题。

目前市场上关于提高动物免疫力的产品种类非常多，但是很少有产品能够起到从源头上 提高动物免疫力，囊素肽是目前已经被证实的免疫增强剂，得到公认的一种免疫增强剂。

随着人们生活水平的提升，对生活质量的要求也越来越高,而且近几年禽流感一直是一个 比较突出的问题，那么研发出一种价格低廉，适合产业化，适用大部分养殖户的免疫增强剂 且效果显著就是一个非常市场非常迫切的需求。

2HCL-Lys-His-Gly-NH₂是一种常见的三肽囊素衍生物，但是目前其合称方法存在废水排 放大，对环境污染大，成本大，且操作不便等缺点。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种三肽囊素衍生物的生产方法，其采用的技术方案如 下：

一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL-Lys-His-Gly-NH₂，包括如 下步骤：

步骤一：将树脂载体用二氯甲烷溶胀，然后将Fmoc-Gly-OH溶解于DMF中，与树脂溶液 混匀，加入催化剂，反应2h，形成Fmoc-Gly-resin，然后加入强碱去除Fmoc保护基团，得 到NH2-Gly-Resin；

Fmoc-Gly-Resin+Piperidine→NH₂-Gly-Resin；

步骤二：将Fmoc-His(Trt)-OH溶解于N,N二甲基甲酰胺中，加入DIC,HOBT将HIS羧 基活化为活泼酯，在惰性溶剂下与NH₂-Gly-Resin反应，得到Fmoc-His(Trt)-Gly-Resin， 然后在强碱性条件下去除Fmoc保护基，得到NH₂-His(Trt)-Gly-Resin；

步骤三：在惰性溶剂下Boc-Lys(Boc)-OH，DIC，HOBT将其羧基活化为活泼酯，与 NH₂-His(Trt)-Gly-Resin反应1h得到

Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin；

步骤四：用TFA处理Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin，去除保护基，从而得到 NH₂-Lys-His-Gly-NH₂；

步骤五：采用高效液相色谱法将流动相调成含有4％的HCL，流动相浓度在适当比例下， 将式六在此流动相下通过柱子即可得到

2HCL-Lys-His-Gly-NH2。

步骤一中所述的Fmoc-Gly-OH的制备方法为在二氧六环中将Fmoc-Osu与H-Gly-OH在适 当PH值下混合反应2h。

步骤二中所述的Fmoc-His(Trt)-OH的制备方法为惰性溶剂中将Fmoc-Osu与H-His(Trt) -OH在适当PH值下混合反应2h。

步骤三中所述的BOC-Lys(Boc)-OH是通过NH2-Lys-OH在惰性溶剂中加入醋酸酐并调节 PH为碱性，室温反应制得。

本发明是用固液结合方法合成三肽囊素，先用液相方法合成所需要的原料，然后用固相 方法将三肽囊素结构合成出来。采用固液分离方法可以有效回收溶剂，确保成本的节约和降 低废水的产出量。

所用的试剂时间以及操作步骤都大幅度缩短，而且大部分试剂以及原料可以回收再利用， 成本这方面得到很大的节省。

附图说明

图1一种三肽囊素衍生物的生产方法流程图

图2AgilentMS分子量鉴定结果

图3AgilentHPLC含量鉴定结果

具体实施方式