[发明专利]利用分子标记鉴别瓠瓜品种果实苦味的方法及其引物

权利要求书

1.一种与瓠瓜品种果实苦味基因连锁的InDel标记，其特征在于该InDel标记由BID50引物组和BID89引物组构成，其引物序列如下：

BID50上游引物：5’- ccatgagccaagagcca-3’；

BID50下游引物：5’- gctgtgtctcttgaagctctaa-3’；

BID89上游引物：5’- cgcttctggtttataggtttac-3’；

BID89下游引物：5’- gctaaaccaatcaaaacctaag-3’。

2.一种筛选权利要求1所述的InDel标记的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)群体及材料准备：选择无苦味的杭州长瓜和蒲县瓠瓜杂交，其F₁代植株所结的果实均呈现苦味，F₂代植株果实苦与不苦出现9:7的分离；

2) 特殊BSA池构建：在F₂代，选择6株果实无苦味的单株构建杂合池，；将果实出现苦味的F₂代单株继续种植，鉴定其子代的果实，选择子代果实苦味不分离的F₂单株建成纯合池；

3)标记筛选：利用162对InDel标记在亲本间和两池间进行多态性筛选，筛选到InDel标记BID89在纯合池中只出现和杭州长瓜一致的条带，在杂合池中同时出现了两亲本的条带；BID50在纯合池中只出现和蒲县瓠瓜一致的条带，在杂合池中同时出现两亲本的条带。

3.一种利用分子标记鉴别瓠瓜品种果实苦味的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）DNA提取、PCR反应及电泳：DNA提取采用试剂盒，按照说明提取；PCR反应体积为12.5μl，包含10–20 ng模板DNA，1×PCR buffer，50 mM KCl，0.1 mM dNTP，0.75–1.5 mM MgCl₂，0.2 μM引物，1U Taq聚合酶；所述的引物采用权利要求1所述的BID50引物组或BID89引物组，BID89引物组与BID50引物组的PCR反应程序为94℃预变性3分钟，94℃变性30秒，55℃退火40秒，72℃延伸40秒，循环35次，最后72℃总延伸5分钟，4℃保存；取3μl PCR产物在8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，Acr:Bis = 19:1或39:1，指示剂为二甲苯青，电泳电压为200V，电泳时间1小时，用银染法染色显带，照相后用Photoshop软件对图片进行处理，观察；

2)检测结果分析：根据电泳结果对BID50、BID89的带型进行赋值，带型与杭州长瓜一致的赋值为1，与蒲县瓠瓜一致的赋值为0，杂合带型赋值为2，赋值后的组合将出现以下情况：

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