[发明专利]一种含有保护剂的毛细管凝胶电泳检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种能够准确检测生物制药如抗体纯 度的毛细管凝胶电泳检测试剂盒。

背景技术

毛细管电泳(capillaryelectrophoresis，CE)技术由传统凝胶电泳(gel electrophoresis)发展而来，其以高压电产生的强电场为驱动力，以微内径的石 英毛细管为分离通道。相比传统的凝胶电泳，CE具有自动化、快速、准确定量 性、高分辨率等优点，很多生物分子，例如蛋白质、多糖及核酸等都可以使用 毛细管电泳来进行分析。十二烷基磺酸钠毛细管电泳(CE-SDS)技术是在毛细 管分离缓冲液中加入线性凝胶形成分子筛，加入阴离子表面活性剂十二烷基磺 酸钠(sodiumdodecylsulfate，SDS)缓冲液至样品中使蛋白变性，并且和蛋白 质通过1∶1.4的质量比结合，由于这种SDS结合蛋白的质荷比相同，使得该结 合蛋白在进行毛细管分离时受到的电场力也相同，但由于不同分子的大小不同， 因而在线性凝胶分子筛中迁移受到的阻力大小不同，使得迁移速率不同，从而 实现表观上分子量不同的分子得到分离。非还原型CE-SDS用碘乙酰胺处理， 主要检测单克隆抗体样品中的不同碎片、轻重链及共价结合的多聚体杂质。

美国Beckman公司PA800+型毛细管电泳仪及配套的检测试剂盒含有以下 组分：样品缓冲液(samplebuffer)，凝胶缓冲液(gelbuffer)，清洗液(0.1M NaOH，0.1MHCl)，内标(interstandard)，对照标准品(controlstandard)，其 中样品缓冲液(samplebuffer)含有100mMTris-HCl，1％SDS及12.5mM碘乙 酰胺。我们在使用该试剂盒中的样品缓冲液对重组抗HER2人源化单克隆抗体 (mAbl)进行非还原型CE-SDS分子大小异构分析时，发现在Beckman厂家 推荐的检测条件(70℃加热10分钟)下，得到的碎片含量(如含有一个抗体 轻链L和含有抗体重链-重链-轻链HHL的碎片)(见图1，CE-SDS主峰含量 89.5％，碎片含量10.5％)明显高于使用其他方法如分子排阻色谱法(SEC- HPLC)所得到的含量(见图2，SEC-HPLC主峰含量＞99％，碎片含量＜ 0.5％)。通过文献(TaylorFR等.Suppressionofsodiumdodecylsulfate- polyacrylamidegelelectrophoresissamplepreparationaritfactsforanalysisofIgG4 half-antibodies.AnalyticalBiochemistry，2006，353，204-208.)及我们的数据分析， 这些增加的碎片杂质可能是由于抗体和SDS结合并进行加热处理过程中形成的 降解产物。使用厂家推荐的碘乙酰胺作为抑制剂能明显减少碎片含量，但碎片 含量仍明显偏高(如含有12.5mM碘乙酰胺作为保护剂能使抗体mAbl纯度从 81％增加到89.5％，但继续增加碘乙酰胺浓度至37.5mM只能使纯度增加至 90.6％)。因此，如何找到一种能够明显降低碎片的形成，从而提高生物制药如 抗体检测准确度的方法是亟待解决的问题。

我们发现，在含有碘乙酰胺的基础上，加入其他类型的保护剂还可以进一 步提高抗体，例如mAbl的CE-SDS检测纯度，即能够更加准确地反映出抗体 药物的质量，从而完成了本发明。

发明内容

本发明实际所要解决的技术问题，就是针对现有的非还原型CE-SDS检测 方法的不足，提供了一种含有保护剂的毛细管凝胶电泳检测试剂盒，该试剂盒 能提高非还原型CE-SDS检测抗体分子大小异构体的准确性。

本发明采用的技术方案为：

一种含有样品缓冲液的毛细管凝胶电泳检测试剂盒，所述样品缓冲液 (samplebuffer)中含有一种保护剂，所述保护剂浓度为10-5000mM，优选为 100-2000mM，更优选500-1000mM。