[发明专利]一种抗2-溴苯丙酮的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及产生的抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，及所产生的抗体。 

背景技术

甲基苯丙胺，俗称“冰毒”，是中枢神经系统也是周围神经系统的强烈的兴奋剂。它在功能上类似于苯异丙胺，但是更有效力，滥用者会处于强烈兴奋状态，表现为：不吃不睡、活动过度、情感冲动、偏执狂、妄想、幻觉和暴力倾向。使用过量会产生急性中毒，表现为不安、话多、易激惹、烦躁、偏执性幻觉，有的会产生自杀或杀人倾向。可出现心血管病症状，肠胃功能障碍，严重的可产生惊厥、脑出血、昏迷致死。长期滥用可造成慢性中毒、体重下降、夜间磨牙；同时，也会发生其他滥用感染合并症，包括肝炎、败血症和性病、艾滋病等。 

全球性的毒品泛滥已成为危害人民健康和影响社会稳定的重要因素之一。国内外都在寻找一种简易、快速、准确的检验方法，以便对毒品生产场所进行大范围简便、有效筛查(尤其边境地区)，达到防止毒品在百姓家庭大量生产的目的。目前毒品检测主要是以金标法进行尿液检测为主，但是这些方法都只是针对吸食毒品本身进行的检测，无法针对生产毒品的原料进行简单，有效的筛查。2-溴苯丙酮(2-Bromopropiophenone，简称BP)，是生产冰毒的核心原料，我们制备了特异性识别BP的单克隆抗体，可用于对生产冰毒的核心原料(2-溴苯丙酮)进行检测，该方法特异性强，灵敏度高。 

发明内容

本发明所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株MabBP1，其产生的抗BP单克隆抗体及其应用。 

本发明的第一个方面提供了能够产生抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞。 

在一个优选的实施方案中，所述杂交瘤细胞是抗2-溴苯丙酮单克隆抗体MabBP1杂交瘤细胞株，该细胞株已于2014年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京)，保藏编号为CGMCC No.9718。 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

本发明的第二个方面提供了抗BP的通用单克隆抗体，其可以特异识别2-溴苯丙酮。 

在一个优选的实施方案中，所述单克隆抗体由上述保藏编号为CGMCC No.9718的抗2-溴苯丙酮单克隆抗体MabBP1杂交瘤细胞株分泌产生。 

本发明的第三个方面提供了抗BP单克隆抗体在BP检测中的应用。 

在一个优选的实施方案中，所述单克隆抗体为本发明第二个方面所述的单克隆抗体。 

在一个更优选的实施方案中，所述单克隆抗体由上述保藏编号为CGMCC No.9718的抗2-溴苯丙酮单克隆抗体MabBP1杂交瘤细胞株分泌产生。 

本发明的第四个方面提供获得能够产生抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其采用细胞融合杂交瘤技术，包括以下步骤：将BALB/c小鼠经偶联BSA的BP(BP-BSA)免疫4次，3天后进行细胞融合，采用ELISA方法筛选融合细胞：即，采用间接ELISA法筛选出抗BP而不抗载体蛋白BSA的阳性孔，再用有限稀释法进行克隆，最终筛选获得能够产生抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明的第五个方面提供抗BP通用单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：将获得的能够产生抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株注射于预先用降植烷处理过的BALB/c小鼠，收集含有抗BP单克隆抗体的小鼠腹水，纯化后即得抗BP单克隆抗体。 

在一个优选的实施方案中，所述能够产生抗2-溴苯丙酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株为上述保藏编号为CGMCC No.9718的抗2-溴苯丙酮单克隆抗体MabBP1杂交瘤细胞株。 

本发明的有益效果在于： 

(1)本发明提供的杂交瘤细胞株MabBP1可以用于制备高效价BP抗体，酶联免疫吸附分析(ELISA)测得的效价可达1.6×10⁶，即抗体稀释1.6×10⁶倍后，检测的结果仍为阳性。 

(2)本发明提供的抗BP单克隆抗体灵敏度高，对BP最低检测浓度是10ug/ml。 

(3)本发明提供的抗BP单克隆抗体可用于检测BP，实际应用价值大。 

附图说明

图1为抗2-溴苯丙酮单克隆抗体检测1ul的1000ug/ml、100ug/ml和10ug/ml的2-溴苯丙酮稀释液和BSA(牛血清白蛋白)、OVA(卵清蛋白)的点杂交结果。 

具体实施方式

实施例1：杂交瘤细胞株MabBP1的制备 

1)偶联BSA的BP(BP-BSA)制备