[发明专利]一种产胆盐水解酶副干酪乳杆菌干粉活菌制剂的生产技术

权利要求书

1.副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029。

2.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029菌株小试生产干粉活菌制剂的方法，其特征在于：将副干酪乳杆菌KL1-Liu以改良MRS培养基于37℃培养16h，如此活化2～3代；将活化好的菌液以3％的接种量移种至501油菜籽蛋白胨改良MRS培养基中，于37℃培养16h，得到扩大培养液；501油菜籽蛋白胨改良MRS培养基配方组成：葡萄糖20g、501油菜籽蛋白胨25g、柠檬酸二铵2g、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、七水合硫酸镁0.58g、四水合硫酸锰0.25g、吐温-80 1mL、蒸馏水1000mL，调节pH为7.0；将上述扩大培养液按4％的接种量移种至2L 501油菜籽蛋白胨改良MRS发酵培养基中，利用5L自动发酵罐进行灭菌和高密度发酵，控制发酵温度34℃，发酵液pH6.5，搅拌转速90r/min，发酵时间16h，得到发酵液；将发酵液于4℃、4000r/min离心20min，收集得到菌泥；在600mL灭菌冻干瓶中，按离心前发酵液1/10体积的量(200mL)，加入14.5％麦芽糊精+5.5％脱脂奶粉的冻干保护剂与收集的菌泥，混合均匀后，得到浓缩发酵剂；将每个冻干瓶装量为100mL的浓缩发酵剂于-30℃预冻13h至完全冻结状态，得到预冻发酵剂；利用美国6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.13mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到产胆盐水解酶副干酪乳杆菌干粉活菌制剂。

3.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029菌株中试生产干粉活菌制剂的方法，其特征在于：将副干酪乳杆菌KL1-Liu以改良MRS培养基于37℃培养16h，如此活化2～3代；将活化好的菌液以3％的接种量移种至501油菜籽蛋白胨改良MRS培养基中，于37℃培养16h，得到扩大培养液；501油菜籽蛋白胨改良MRS培养基配方组成：葡萄糖20g、501油菜籽蛋白胨25g、柠檬酸二铵2g、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、七水合硫酸镁0.58g、四水合硫酸锰0.25g、吐温-801mL、蒸馏水1000mL，调节pH为7.0；将上述扩大培养液按4％的接种量移种至25L 501油菜籽蛋白胨改良MRS发酵培养基中，利用50L自动发酵罐进行灭菌和高密度发酵，控制发酵温度34℃，发酵液pH6.5，搅拌转速140r/min，发酵时间16h，得到发酵液；将发酵液于3～6℃条件下，16000r/min离心10～20min，收集得到菌泥；在冻干托盘中按离心前发酵液1/10体积的量(2500mL)，加入14.5％麦芽糊精+5.5％脱脂奶粉的冻干保护剂与收集的菌泥，混合均匀后，得到浓缩发酵剂；将浓缩发酵剂于-55℃预冻17h至完全冻结状态，得到预冻活菌制剂；利用北京四环真空冷冻干燥机将预冻活菌制剂于-66℃、真空度0.08mBar的条件下，冻干72h至完全干燥状态，得到产胆盐水解酶副干酪乳杆菌干粉活菌制剂。