[发明专利]一种橄榄苦苷脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于脂质体制备技术领域，尤其涉及一种橄榄苦苷脂质体的制备方法。

背景技术

橄榄苦苷主要存在于素馨花、小叶丁香、紫丁香及油橄榄叶等植物中，具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤及保护心血管系统等作用，其中较为重要的是它的抗癌活性，多个动物体内实验证实了橄榄苦苷对乳腺癌、前列腺癌及直肠癌有很好的治疗效果。目前橄榄苦苷的应用多为普通剂型，药物对肿瘤组织与正常组织无识别能力，给药后随血液循环进入到全身各组织与器官，在各组织器官的分布情况主要与器官的血流量相关，导致肿瘤部位的药物浓度较低，需要通过多次重复给药才能达到有效治疗浓度，而血流量丰富的正常组织却拥有大量的橄榄苦苷，不仅造成使用上的浪费，同时给正常组织带来毒副作用。将橄榄苦苷制成脂质体，可通过肿瘤的EPR效应使药物更长时间地停留在肿瘤部位，特异性作用于肿瘤，减少在正常组织的分布，增强杀伤力，提高疗效，降低毒副作用；还可在脂质体上连接具有主动靶向作用的配体，将药物定位浓集至癌变部位，进一步改善疗效，降低毒副作用。由于橄榄苦苷在酸碱性环境中易降解，将它包封在脂质体中，可减少其与胃肠道液的接触，减慢橄榄苦苷的降解速度，改善吸收与口服生物利用度，延长体内作用时间。脂质体增强药物活性、降低毒副作用的研究很多，如邓旭坤发表的“马钱子碱及其脂质体对移植性荷瘤小鼠抗肿瘤作用的对比研究”一文的研究结果显示，马钱子碱制成脂质体后对Heps肿瘤与S180肿瘤的抑制率明显高于游离药物(中草药，2006,27(3)：389-393)；赵荣生等发表的“两性霉素B脂质体体内外毒性及抗真菌活性的研究”指出，两性霉素B制成脂质体后，与市售注射剂比较，溶血现象明显降低，急性毒性降为注射剂的1/6，而抗真菌的活性与注射剂相当(中国抗生素杂志，2001,26(2)：123-126)；秦晶等的研究论文“阿魏酸脂质体的制备及其体外抗氧化活性评价”显示，阿霉素脂质体的体外抗氧化活性显著高于阿霉素溶液(药学学报，2007，42(10):1092-1096)。

目前尚无有关橄榄苦苷脂质体研制的报道，仅检索到1篇内容有所关联的文献。Paiva-Martins等发表了题为“Activity and location of olive oil phenolic antioxidants in liposomes”(Chemistry and Physics of Lipids,2003,124:23-36)的文章，文中作者为研究橄榄油中的多酚类成分对低密度脂蛋白氧化的延缓与抑制作用，制备了一大单层脂质体替代体内的生物脂质膜，考察橄榄苦苷、羟基酪醇等橄榄油内的多酚组分对脂质生物膜氧化的保护作用。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种橄榄苦苷脂质体的制备方法，旨在解决橄榄苦苷给药后对正常组织与肿瘤组织无选择性的问题，本发明将橄榄苦苷制成脂质体，依靠肿瘤的EPR效应，使脂质体能携带橄榄苦苷定位浓集在肿瘤部位，减少其在其他正常组织中的分布，加强药物对肿瘤的杀伤能力，降低药物对正常组织器官的毒副作用，提高整体治疗效果。

本发明实施例是这样实现的，一种橄榄苦苷脂质体的制备方法，该橄榄苦苷脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一，按4:1至20:1的质量比例称取磷脂与胆固醇，并称取适量的橄榄苦苷，使药物与脂质的质量比例为20:1至150:1；橄榄苦苷的量由磷脂与胆固醇的量决定，磷脂与胆固醇确定后，橄榄苦苷的量应占它们的1/20至1/150；

步骤二，加入15-50倍的低沸点有机溶剂，加热使溶解；

步骤三，30-70℃下减压蒸馏除去有机溶剂，使在器壁形成一层脂质薄膜；

步骤四，加入质量为脂质膜15-50倍的水性介质，超声20-90min，使脂质薄膜分散于介质中形成脂质体；

步骤五，分别用0.45及0.22μm的微孔滤膜过滤3-6次。

进一步，在步骤一中，磷脂为大豆磷脂，氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黄磷脂，氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油中的一种或几种。

进一步，在步骤二中，低沸点有机溶剂，包括乙醚、戊烷、二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇、四氢呋喃、己烷中的一种或几种。

4、如权利要求3所述的橄榄苦苷脂质体的制备方法，其特征在于，低沸点有机溶剂优选为二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇中的一种或几种。

进一步，在步骤四中，分散脂质薄膜的水性介质，包括水、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、蔗糖溶液、PVA溶液、葡萄糖溶液、海藻糖溶液、PEG溶液的一种或几种。