[发明专利]内切几丁质酶及其编码基因和在生产几丁二糖中的应用

权利要求书

1.一种内切几丁质酶在水解几丁质生产几丁二糖中的应用；

所述内切几丁质酶是如下1）或2）：

1）由序列表中序列2的第40～696所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2）由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于；所述内切几丁质酶是通过下述方法制备获得的；

发酵培养重组菌，得到所述内切几丁质酶；

所述重组菌为将重组载体导入大肠杆菌得到的重组大肠杆菌；

所述重组载体是在pET28a(+) 的BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点间插入所述内切几丁质酶的编码基因得到的重组表达载体；

所述编码基因为如下1) ～ 3) 中任一基因：

1) 其编码序列是序列表中序列1 的自5’末端第118 ～ 2091 位；

2) 其编码序列是序列表中序列1 ；

3) 与1) 或2) 的基因具有90％以上的同源性且编码序列表中序列2第40～696所示的氨基酸序列组成的蛋白质或序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的基因；

发酵培养条件是：培养温度是37℃至OD₆₀₀达到0.6 ～0.8，加入终浓度1mM 异丙基硫代-β-D- 半乳糖苷(IPTG)，30℃培养过夜；

所述方法还包括将所述内切几丁质酶进行纯化的步骤，所述纯化包括以下步骤：

1) 将所述重组菌破壁；

2) 取上清液用Ni-IDA或Ni-NTA亲和层析进行纯化；

3) 检测各个纯化步骤中收集样品的蛋白浓度及酶的纯度。