[发明专利]一种快速培育转基因玉米自交系的方法

权利要求书

1.一种快速培育转基因玉米自交系的方法，包括如下步骤：

(1)转基因基础材料组配：利用杂交诱导单性生殖方法从中选育转基因玉米自交系的遗传基础材料为含有转入抗虫、抗除草剂目标性状基因的杂交组合、杂交种、各类群体或由其衍生的F2、F3代群体，通过将含有目标转基因性状的种质与优良自交系、各类群体材料在隔离条件下进行杂交获得；

(2)杂交诱导：在隔离条件下，将组配的转基因基础材料和诱导系种植，转基因基础材料100株，以4∶1配播诱导系，诱导系选用Stock6、吉高诱3号、农大高诱系列，选用花期与基础材料相近的诱导系，或采取分2-3期播种措施，确保二者花期相遇，顺利完成杂交；

(3)单倍体鉴选：

单倍体籽粒鉴定：秋天选择籽粒糊粉层为黑色或紫红色的玉米果穗进行收获，自然晾晒20-30天后进行脱粒；根据籽粒表型性状对单倍体作初步鉴选，胚乳糊粉层着色为黑色、或紫红色，胚盾状体无色、盾状体呈倒三角型且向内凹陷明显的为拟单倍体籽粒；

采用人工化学加倍方法需进行二次鉴定，在拟单倍体幼芽长至1-2cm时，淘汰胚根长且粗壮、长势强壮的幼芽，选择胚根纤细、长势弱小的幼芽；

单倍体田间确认：在田间，拟单倍体植株长到8-10叶期前后，依据植株ABP1紫色标记及形态学特征对单倍体进行鉴别；将幼苗叶鞘和叶片为紫色、植株高大粗壮的植株均予以淘汰，而幼苗长势慢、株高低、叶片较少、狭窄、短且较上冲、叶色浅则确认是单倍体植株，进行自交授粉处理；

(4)单倍体加倍；采用自然加倍或人工化学加倍；

不同的基础材料、生态环境、种植时间均可对自然恢复率有影响；对于散粉率较高的单倍体基因型依靠育性的自然恢复实现自交结实；选择隔离条件好、地势平坦，肥力较好地块种植单倍体，及时浇水并进行田间精细管理；当单倍体植株雄穗有花药外露并有明显花粉产生时，取其花药进行精细自交授粉，授粉后严格封闭好套雌穗的袋，避免外来花粉污染；

对自然加倍率很低的单倍体基因型必须进行人工加倍处理；加倍方法有浸芽法和浸根法；

浸芽法采用秋水仙素溶液浸泡切过的幼芽的方法，当单倍体子粒萌发的幼芽长到2～3cm时，人工切去胚芽鞘尖端1-2mm，用秋水仙素0.06％和二甲基亚砜5％的混合溶液浸泡芽9小时，再用清水清洗1.5小时，放入发芽盘中进行缓苗处理，缓苗2天后，选择隔离条件好、地势平坦，肥力较好地块进行移苗，按照株距20cm进行移栽，及时浇水并进行田间精细管理；

浸根法采用秋水仙素溶液浸泡单倍体幼苗根；在幼芽期或幼苗期进行，将3叶期的单倍体幼苗根系在0.05％的秋水仙素溶液中浸泡24小时，用清水冲洗处理后，幼苗移栽于隔离条件好、地势平坦，肥力较好地块，按照株距20cm进行移栽，及时浇水并进行田间精细管理；

在授粉时，及时给单倍体雌穗套上小袋，仔细并反复观察每一个单株的雄穗，及时取花粉，发现雄穗散粉，立刻授粉；每个单株授粉2次，花粉量大的1次即可；

(5)转基因DH系鉴定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述杂交种包括单交种、三交种、双交种，所述各类群体包括综合杂交种；含目标转基因性状的种质通过农杆菌介导法、基因枪法获得。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述的杂交诱导：诱导杂交授粉方式与常规杂交授粉相同，以被诱导转基因基础材料为母本，在转基因基础材料刚露出雌穗后，立即使用硫酸纸袋对雌穗人工套袋隔离，并在其抽出花丝长到5cm或吐丝3天后，以单倍体诱导系做父本，前一天套袋，取其新鲜花粉进行授粉；极端高温天气时授粉时间在上午11：00前；杂交果穗成熟后收获并妥善保管。