[发明专利]一种Bt蛋白对龟纹瓢虫的安全性评价方法

权利要求书

1.一种Bt蛋白对龟纹瓢虫的安全性评价方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)配制饲喂溶液：蔗糖溶液、蛋白酶抑制剂溶液和Bt蛋白溶液；

所述蔗糖溶液作为阴性对照；

所述蛋白酶抑制剂溶液作为阳性对照；

所述Bt蛋白溶液为含有Bt蛋白的蔗糖溶液；

(2)将刚孵化的龟纹瓢虫1龄幼虫单头放入离心管中，并在离心管底部加入饲喂溶液，置于光照培养箱中培养24小时后，将幼虫转入新的离心管，并每日补充饲料；

当幼虫发育至2龄、3龄和4龄时，均更换离心管并重复上述操作；

每一种饲喂溶液作为一个试验处理，每一个试验处理的幼虫数量不少于35头；

(3)每天观察并记录幼虫的发育、蜕皮及存活情况，直至其羽化，成虫羽化后的12小时内，将其分雌雄，并在天平上称重；

(4)选择幼虫和蛹的发育历期、幼虫和蛹的死亡率和雌虫和雄虫的体重作为评价参数指标，评价Bt蛋白对龟纹瓢虫的安全性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Bt蛋白溶液的浓度为450-550μg/ml。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述1龄幼虫的饲喂溶液加入量为1μl。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述2龄幼虫的饲喂溶液加入量与1龄幼虫的相同；所述3龄和4龄幼虫的饲喂溶液加入量为1龄幼虫的2倍。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)选择幼虫和蛹的发育历期、幼虫和蛹的死亡率和雌虫和雄虫的体重作为评价参数指标，使用SPSS软件进行数据分析，幼虫和蛹的发育历期分析采用Mann–Whitney U测验方法，幼虫和蛹的死亡率的分析采用卡方检测，雌虫和雄虫的体重分析采用学生式t测验，评价Bt蛋白对龟纹瓢虫的安全性。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述光照培养箱的培养条件为：温度25℃±1℃，相对湿度60％-70％，光周期L:D＝14:10。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述饲料为1龄或2龄的豌豆蚜。