[发明专利]一种维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药，特别是维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸作为药物载体的一种维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸的制备方法及其应用。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的主要疾病,肿瘤的化疗已成为当今治疗恶性肿瘤最有效、最具潜力的方法,也是临床上常用的治疗癌症的主要手段。近年来,随着化疗药物不断问世,使得临床肿瘤治疗康复水平有了很大提高。但是也存在许多肿瘤化疗效果不理想的问题,肿瘤细胞对药物的耐药性严重地影响了药物的临床化疗效果。据美国癌症协会估计,90％以上的肿瘤患者死于不同程度的肿瘤细胞耐药性。因此开发抗肿瘤耐药性的药物制剂势在必行。

研究发现，CD44是一种在许多肿瘤细胞表面过表达的跨膜糖蛋白，已成为肿瘤靶向制剂的热点靶点之一。CD44与透明质酸(hyaluronic acid,HA)结合的高度特异性和HA良好的生物相容性是设计和制备HA介导的肿瘤靶向给药系统的关键。卵巢癌、结肠癌、胃癌、急性白血病等多种癌症的肿瘤细胞都大量表达了HA受体CD44和RHAMM，因此，这些肿瘤细胞具有很高的HA结合和吸收能力。有实验证明，HA很容易与肿瘤细胞细胞膜结合，并且能够很快地通过HA与受体的相互作用进入细胞内，这就意味着HA能够作为一个很好的载体把抗癌药物运输进入肿瘤细胞。

维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)是天然维生素E的酯化衍生物，可诱导肿瘤细胞凋亡，却对正常细胞组织没有毒性作用。研究报道VES作用于白血病细胞、前列腺癌细胞等后，Bcl-2蛋白表达下降。Bcl-2蛋白是一种重要的细胞凋亡抑制蛋白，有研究报道，Bcl-2可使肿瘤细胞对紫杉醇产生抗药性，而降低细胞Bcl-2的水平则可使细胞对紫杉醇敏感。这种特点使得VES成为一种很有前途的抗肿瘤耐药性的药物。但如何制备维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸，并实现制备抗肿瘤药物中的应用，至今未见有公开的报导。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸的制备方法及其应用，可有效解决维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸的制备，并实现在抗肿瘤药物中的应用问题。

本发明解决的技术方案是，一种维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸的制备方法，将透明质酸分别通过亚烷基二胺或二硫代亚烷基二胺为连接臂和维生素E琥珀酸酯按重量比1:1～100共价连接，在水介质中形成纳米胶束；所述透明质酸为分子量大于等于600道尔顿且小于等于400kd的低分子量透明质酸；所述连接臂为碳原子数2～12的亚烷基二胺(如乙二胺、1,2-丙二胺、1,3-丙二胺、1,4-丁二胺、1,10-癸胺等)或二硫代亚烷基二胺(如胱胺、3,3’-二硫代二丙胺、4,4’-二硫代二丁胺等)；所述二硫代亚烷基二胺中的二硫键在体内具有氧化还原敏感性，能够在肿瘤细胞内部靶向的释放抗肿瘤药物，具体步骤如下：

(1)透明质酸(HA)的氨化：将20～200mg透明质酸溶于10～100ml有机溶剂或缓冲液中，以100～500mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、50～300mg羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温反应10～200min，得反应溶剂；将亚烷基二胺或二硫代亚烷基二胺按与透明质酸5～10︰1的摩尔比加入上述反应溶剂中，室温反应6-48h，再加入丙酮沉淀，抽滤，得沉淀，加水复溶沉淀，透析，冷冻干燥，得氨化的透明质酸；

所述的有机溶剂为甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜的一种；

所述的缓冲液为pH7～10的磷酸盐缓冲液；

(2)将50～300mg维生素E琥珀酸酯溶于10～100ml反应溶剂中，以100～500mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、50～300mg羟基琥珀酰亚胺为活化剂，维生素E琥珀酸酯的羧基和上述氨化的透明质酸中的氨基按摩尔比1︰1进行缩合反应6-48h，得反应液，再加入反应液体积2-3倍的丙酮进行沉淀，抽滤，得沉淀，加水复溶沉淀，透析，冷冻干燥，得维生素E琥珀酸酯修饰的透明质酸，一端具有亲水性，另一端具有疏水性，在水介质中形成纳米胶束；

所述反应溶剂为水、或甲酰胺、或N,N-二甲基甲酰胺与水、或甲酰胺与水、或N,N-二甲基甲酰胺与甲酰胺的混合溶剂，或其它类似溶剂以及其它类似溶剂的混合物。