[发明专利]一种肿瘤血管梗塞剂多肽、基因、表达载体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤血管靶向药物技术领域，尤其涉及一种肿瘤血管梗塞剂多肽、基因、表达载体及其应用。

背景技术

肿瘤血管是肿瘤细胞获取营养物质及排除代谢产物的通道，也是肿瘤细胞逃逸、转移的重要途径之一，其形态学和功能都有别于机体的正常血管系统，因而是肿瘤靶向治疗的关键靶点之一。肿瘤血管靶向治疗主要包括两种模式：抑制新生血管生成和阻断已有肿瘤血管。其中阻断肿瘤已有血管疗法主要是通过选择性的破坏肿瘤已有的血管，切断肿瘤血供，诱发肿瘤细胞发生缺血性坏死，从而达到治疗肿瘤的目的。因此，如何实现特异的阻断肿瘤部位的血管，而对机体正常组织血管没有影响，成为研究的热点。

组织因子(TF)是一个分子量约为47kDa的跨膜糖蛋白，在血栓形成过程中起重要的作用。正常情况下，组织因子位于血管壁外膜细胞，不存在于循环中或不与循环血液接触。当血管壁的完整性遭到破坏时，组织因子就会暴露于循环血液,通过激活凝固级联反应发挥止血作用。组织因子由263个氨基酸残基组成，其中氨基端的219个氨基酸残基位于细胞膜外，是组织因子的活性部位。研究表明，当该区域处于游离状态时，并没有凝血活性；但当它被锚定在磷脂膜表面，并暴漏于血液中时，则会产生类似于全长因子的凝血活性，因此该段序列被称之为截断的组织因子(tTF)。鉴于此，如果用具有肿瘤血管靶向功能的分子将tTF特异的定位到肿瘤血管壁表面，则能够特异性的在肿瘤血管中诱发血栓形成事件，从而切断肿瘤部位的血供和代谢产物排除途径，达到治疗肿瘤的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种出一种肿瘤血管梗塞剂多肽，编码其的基因，表达其的表达载体以及其在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。本发明利用一种肿瘤血管靶向肽，将具有促凝活性的截断的组织因子tTF特异性的定位于肿瘤血管内皮表面，从而诱发血栓形成，阻断肿瘤血供，提供了一种具有高靶向性、安全性，免疫原性低的肿瘤血管梗塞剂。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种肿瘤血管梗塞剂多肽，所述的肿瘤血管梗塞剂多肽由具有凝血功能的活性域与肿瘤靶向功能的靶向肽两部分构成，所述的靶向肽被连接到活性域的C末端。

作为优选，所述的活性域为截断的组织因子tTF，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下：

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE。

如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列即为组织因子位于细胞膜外的氨基酸残基序列，当其处于游离状态时，没有凝血活性；当其通过靶向肽定位于肿瘤血管内皮细胞膜上时，则会发挥组织因子的功能，激活凝血途径，诱发血栓形成。

作为优选，所述靶向肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下：CREKA。

本发明中采用的肿瘤血管靶向分子是由5个氨基酸构成的一种多肽(CREKA)。该多肽通过噬菌体抗体库筛选技术而获得，能够特异性识别肿瘤血管壁表面的纤维蛋白-纤连蛋白复合物(fibrin-fibronectin complex)，从而定位到肿瘤血管内皮表面。

作为优选，所述肿瘤血管梗塞剂多肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列(从N端到C端)如下：

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRECREKA。