[发明专利]一种C反应蛋白定量测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种C反应蛋白定量测定试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成。

2.根据权利要求1所述的C反应蛋白定量测定试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括清洗液，所述清洗液的配置方法将12.12g的Tris、5.82g的氯化钠、50mL的Tween-20、50mL的曲拉通-100，加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解。

3.如权利要求1所述的一种C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法，其特征在于：分别配制C反应蛋白校准品、C反应蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；将C反应蛋白校准品、C反应蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到C反应蛋白的定量测定试剂盒。

4.根据权利要求3所述的C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法，其特征在于：所述校准品、质控品、抗试剂按照如下方法制备而成：

A、校准品、质控品的配制：

用校准品缓冲液溶解C反应蛋白，配置C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品；其中，所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；

B、抗试剂的配制：

1)抗试剂缓冲液的制备：

将12.12mg～60.57mg的Tris、0.01g～0.05g的四环素、1g～5g的绵羊血清、3g～10g的新生牛血清、1g～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，制得抗试剂缓冲液；

2)将异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体和碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体加入到所述抗试剂缓冲液中充分搅拌至完全溶解。

5.根据权利要求3所述的C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法，其特征在于所述抗试剂是按照以下步骤制备：

1)异硫氰酸荧光素与C反应蛋白抗体偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体：

首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，然后按照质量比为C反应蛋白：异硫氰酸荧光素溶液＝1:1.1的二者转移到棕色玻璃瓶里，室温下搅拌1～2小时；充分反应后使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体；

2)碱性磷酸酶与C反应蛋白抗体偶联，获得碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体：

首先用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液，按照摩尔比为碱性磷酸酶：C反应蛋白＝1:2～1:10的二者转移至棕色玻璃瓶中，室温下搅拌4～5小时，充分反应后使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化得到碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体；

3)将步骤1)中获得的异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体和和步骤2)中获得的碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的Tris盐缓冲液中，充分搅拌后获得所述抗试剂；所述表面活性剂为Tween 20、Triton X-100、Bronidox中的一种或多种，表面活性剂的添加量为0.01％～0.5％。

6.根据权利要求3所述的C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法，其特征在于所述磁微粒试剂是按照以下步骤制备的：

1)将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液放入反应瓶中，将该反应瓶在磁场内放置15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向反应瓶中加入相当于反应瓶中羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20-30min；再将反应瓶置于磁场中15min后吸去上清；重复清洗羧基磁珠3遍；最后将羧基磁珠溶液定容到10-50mg/mL，混匀待用；所述磁微粒缓冲液的配置方法是将12.12mg的Tris，5.82mg的氯化钠，50g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解即得；

2)连接反应：按照质量比羧基磁珠溶液：抗异硫氰酸荧光素抗体＝100:1的比例在步骤1)所制得的羧基磁珠溶液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，在2～8℃内保持混匀状态反应18小时；

3)反应瓶在磁场中放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗3遍，随后定容至10mg/mL，2～8℃保存，制得所需待用磁微粒试剂。