[发明专利]抗人胃癌相关蛋白GCRG213的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗人胃癌相关蛋白GCRG213的单克隆抗体。

背景技术

蛋白GCRG213是应用荧光标记的mRNA差异显示技术，从我国人胃窦部进展期腺癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中筛选并克隆的1条胃癌高表达的mRNA翻译产生的。蛋白GCRG213的氨基酸序列如序列表序列1所示，编码该蛋白的全长cDNA如序列表序列2所示，序列表序列2的第13位至第438位为开放阅读框架。由于蛋白GCRG213的表达与胃癌显著相关，GCRG213蛋白表达的检测对胃癌的诊断和研究分析具有重要意义。目前，还没有商业化的针对蛋白GCRG213的单克隆抗体、杂交瘤细胞株和相关试剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗人胃癌相关蛋白GCRG213的单克隆抗体。

本发明提供的抗人GCRG213蛋白的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.7602的杂交瘤细胞株产生的；所述人GCRG213蛋白为序列表序列1所示蛋白。

本发明另一个目的是提供一株分泌抗人GCRG213蛋白的单克隆抗体的的杂交瘤细胞株GCRG213。

本发明提供的分泌抗人GCRG213蛋白的单克隆抗体的的杂交瘤细胞株GCRG213，其保藏号为CGMCC No.7602；所述人GCRG213蛋白为序列表序列1所示蛋白。

本发明保护保藏号为CGMCC No.7602的杂交瘤细胞株GCRG213。该杂交瘤细胞株已于2013年05月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.7602。

本发明所提供的单克隆抗体或杂交瘤细胞株可用于制备检测或辅助检测人GCRG213蛋白的试剂或试剂盒；所述人GCRG213蛋白为序列表序列1所示蛋白。

本发明第三个目的是提供一种检测或辅助检测人GCRG213蛋白的酶联免疫试剂盒。

本发明提供的试剂盒，其包括独立包装的上述的单克隆抗体，所述人GCRG213蛋白为序列表序列1所示蛋白。

本发明的实验证明，以组氨酸标记的序列表序列1所示蛋白为免疫原免疫小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合获得杂交瘤细胞株GCRG213CGMCC No.7602，该杂交瘤细胞株所稳定分泌的抗蛋白GCRG213的单克隆抗体的亲和常数达2.0×10⁹L/mol。以该单克隆抗体为检测抗体建立的酶联免疫方法检测蛋白GCRG213，检测限为0.9—0.001ug/ml本发明所提供的抗蛋白GCRG213的单克隆抗体具有检测限低，检测范围广，且高效、准确的优点，可广泛应用于人蛋白GCRG213的定性和定量检测。

附图说明

图1为PCR扩增GCRG213编码基因的琼脂糖凝胶电泳结果。其中，泳道M为DNAMarker；泳道1为PCR扩增产物。

图2为目的蛋白GCRG213的SDS-PAGE分析结果。其中，泳道M为蛋白Marker。

图3为抗蛋白GCRG213的单克隆抗体的Western blot鉴定结果。

图4为抗蛋白GCRG213的单克隆抗体在正常胃黏膜组织(图A)、胃癌组织(印戒细胞癌)(图B)的免疫组化结果(放大倍数：400)。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、杂交瘤细胞株的获得及抗人胃癌相关蛋白GCRG213的单克隆抗体的制备

一、免疫原的制备

1、全基因合成

以pGEM-T质粒为模板，使用引物5′-cgcgaattcATGCAACAAGAAGAGCTAACTATCCTAAATA-3′和5′-cgcaagcttaGTTTTGAGTGAGCTTCTTAATCCTAAGTTCG-3′，进行PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳(结果如图1所示)，回收纯化426bp的DNA片段，将该片段连接于载体pGEM-T的TA克隆位点处，经测序证实，获得了在载体pGEM-T的TA克隆位点处插入序列表序列2所示DNA片段的重组载体pGEM-T-G。序列表序列2自5’末端13-438位核苷酸为序列表序列1所示人GCRG213蛋白的编码序列。

2、重组表达载体的构建