[发明专利]Wip1敲除在促进小鼠骨髓间充质干细胞迁移中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及Wip1(wild-type p53-induced phosphatase)敲除在促进小鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMMSCs)迁移中的应用。

背景技术

干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。干细胞是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的始祖细胞。间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是干细胞的一个研究分支，其具有自我更新，多向分化，免疫调节及寻靶等一系列优势，为将来细胞治疗呈现出希望。BMMSCs来源于骨髓，可在体外培养扩增，并能在体外特定条件下能分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、神经元细胞等；同时具有迁移能力和免疫调节功能，能有效的用于多功能的治疗。

目前，关于MSCs用于治疗十余种难治性疾病的研究已开始进行，其除了用来促进恢复造血，与造血干细胞共移植提高白血病和难治性贫血等以外，还用于心脑血管疾病，肝硬化、骨和肌肉衰退性疾病、脑和脊髓神经损伤、老年痴呆及红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病的治疗研究，已经取得的部分临床试验结果令人鼓舞。

然而自体MSCs的应用过程中逐渐暴露了不便之处：例如个体间MSCs扩增能力差异很大；潜在的肿瘤细胞污染风险；培养需要一定的时间，不能及时适应病情的需要，其中MSCs和其他原代细胞一样在体外培养过程中具有生长停滞，过早衰老等相似的情况。这些制约了自体MSCs的使用。涉及到MSCs迁移到靶位置和生长停滞的一些调控因子及机制研究的不够深入，报道的较少。因此，深入解析MSCs增殖和迁移信号转导途径网络，探讨如何增强MSCs向受损组织趋化和迁移的能力，可以为提高MSCs移植效率和应用提供新思路和理论依据。

细胞在增殖和迁移过程中都涉及到蛋白的磷酸化过程，Wip1是丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由PPM1D基因编码。其主要表达于细胞核内，参与多条通路关键元件磷酸化/去磷酸化的过程。目前研究报道中，未见其参与MSCs迁移的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供敲除动物Wip1基因的物质的应用。

本发明提供的敲除动物Wip1基因在制备具有如下(1)-(4)中至少一种功能的产品中的应用：

(1)促进动物BMMSCs迁移；

(2)抑制动物BMMSCs增殖；

(3)使动物BMMSCs出现G2细胞阻滞；

(4)使动物BMMSCs生长停滞和/或早衰；

Wip1基因的核苷酸序列为序列表中序列1。

上述应用中，所述促进动物BMMSCs迁移体现在提高动物BMMSCs的Rac1活性、促进PI3K/AKT表达和/或促进动物BMMSCs丝状伪足的形成；

所述使动物BMMSCs出现G2细胞阻滞体现在抑制动物BMMSCs中cyclinB1表达。

上述应用中，所述动物为小鼠。

上述应用中，所述产品为药物。

本发明另一个目的是提供敲除动物Wip1基因的物质的另一种应用。

本发明提供的提供敲除动物Wip1基因的物质在制备具有如下A-D中至少一种功能的产品中的应用：

A、提高动物BMMSCs中Rac1活性；

B、促进PI3K/AKT表达；

C、促进动物BMMSCs丝状伪足的形成；

D、抑制动物BMMSCs中cyclinB1表达。

上述应用中，所述动物为小鼠。

上述应用中，所述产品为药物。

本发明实验证明，利用原代Wip1^-/-小鼠提取出来的原代BMMSCs经过细胞形态学观察，分化能力鉴定，细胞表面特异标记识别鉴定，证明Wip1敲除可以促进小鼠BMMSCs迁移。传统研究方法利用以构建好的MSCs细胞系，在其基础上过表达或者干扰某基因来研究MSCs增殖停滞和迁移的分子机制。而本发明是利用敲除某基因的原代MSCs进行分子机制研究，相对传统而言，能做到既能完全排除细胞系本身所具备无限增长的影响，又能排除未彻底清除某基因所保留部分生物学功能对机理研究的影响。