[发明专利]生产L-氨基酸的方法

说明书

提供了使用重组棒杆菌微生物来生产L‑氨基酸的方法，在该重组棒杆菌微生物中利用基因转录抑制方法减弱了目的基因的表达。

相关申请

本申请要求于2013年10月11日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请号10-2013-0121090以及于2014年7月18日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请号10-2014-0091307的权益，以引用的方式将其公开的内容整体纳入到本文之中。

发明领域

本发明的一个或多个具体实施方式涉及利用基因转录抑制法来生产L-氨基酸的方法。

发明背景

相关技术的描述

丙酮酸，其是在棒杆菌(coryneform)微生物中对各种碳源进行糖酵解而产生的，经由草酰乙酸而转变成天冬氨酸。天冬氨酸可通过不同的生物合成通路转变成多种氨基酸，如苏氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸以及赖氨酸等(图1)。因此，可抑制处于氨基酸生物合成过程中各个分支点上的基因的表达，来降低副产物生成并提高目的氨基酸生产。

如上所述，为了利用基因工程和代谢工程开发能够高效生产目的材料的微生物菌株，需要选择性地控制与微生物各种代谢途径相关的基因的表达。最近，报道了一种用于减弱基因表达的技术，称之为“人工会聚转录”(artificial convergent transcription)(Krylov等，J Mol Microbiol Biotechnol，18：1-13，2010)。人工会聚转录是一种用于减弱目的基因表达的技术，通过将启动子插入到目的基因的转录终止子的下游区域中，使得启动子的相对方向(opposite direction)引起转录过程中源自每个启动子的RNA聚合酶复合体的碰撞。

本发明人开发了一种在乙酸盐存在的情况下选择性抑制目的基因表达的技术，通过在目的基因转录相对的方向上插入乙酸盐诱导型启动子进行，并有效地应用该技术来抑制棒杆菌微生物中位于分支点的基因的表达。随后发明人证实通过利用该技术提供了以高产量(yield)生产L-氨基酸的棒杆菌微生物并完成了本发明。

发明概述

本发明的目的在于提供一种通过利用乙酸盐诱导型启动子抑制目的基因转录来生产L-氨基酸的方法。

本发明的一个具体实施方式提供了生产L-氨基酸的方法，该方法包括：

1)培养能够生产L-氨基酸的重组棒杆菌微生物，其中该重组棒杆菌微生物通过将乙酸盐诱导型启动子插入到染色体中目的基因的终止密码子的下游转化的；以及

2)在培养过程中加入乙酸盐以减弱目的基因的表达并增强重组棒杆菌微生物的L-氨基酸生产能力。

附图简述

根据结合附图进行的实施方式的以下描述，这些和/或其它方面将变得显而易见的以及更容易理解，其中：

图1显示了棒杆菌微生物中的氨基酸生物合成过程的分支点；以及

图2为示意图，显示了通过将aceA基因启动子a)插入到aceE基因的终止密码子和转录终止子上游之间或b)以与aceE基因转录方向相反的方向插入至转录终止子下游而使得aceE基因表达受抑制。

发明详述

现在详细参考实施方式，其实例在附图中例示，其中相同的参考编号在全文中代表相同的要素。在这个方面，本发明具体实施方式可具有不同的形式，并且不应当被解释为限于本文所述的说明书。因此，下文中仅参照附图描述具体实施方式以解释本发明的方面。“至少一个/种”等表述，当在一系列要素之前时，修饰了整个系列的要素，而并不是修饰该系列的单个要素。

在下文中，详细描述了本发明。

本发明的一个具体实施方式提供了生产L-氨基酸的方法，该方法包括：