[发明专利]一种SAMHD1基因敲除细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201410654987.9 | 申请日： | 2014-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN104450784A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 靳昌忠;吴南屏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 samhd1 基因 细胞系 构建 方法 | ||
1.一种SAMHD1基因敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）针对SAMHD1基因的CDS1选取作用靶点，并设计2对识别序列，分别为L1/R1、L2/R2；针对SAMHD1基因的CDS2选取作用靶点，并设计2对识别序列，分别为L3/R3、L4/R4；L1~L4的序列如SEQ ID NO.17~SEQ ID NO.20所示，R1~R4的序列如SEQ ID NO.21~SEQ ID NO.24所示；
（2）将靶点识别单元模块的基因片段分别按照L1/R1、L2/R2、L3/R3、L4/R4序列进行串联，串联成功后克隆入pCAG-T7-TALEN(Sangamo)- Destination质粒，共构建4对TALEN表达质粒对；其中，靶点识别单元模块的基因片段按照L1序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；按照R1序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；按照L2序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；按照R2序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；按照L3序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；按照R3序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；按照L4序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；按照R4序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示；
（3）将构建好的4对TALEN表达质粒对分别用脂质体转染试剂盒转染到表达SAMHD1的293T细胞系中，48小时后将细胞在含有浓度为100ug/ml的新霉素的DMEM培养基中培养10-14天，筛选出活细胞，得到敲除SAMHD1基因的细胞系。
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