[发明专利]含anti-miRNA-214转基因植物的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种含anti‑miRNA‑214转基因植物的制备方法及其应用。具体地，本发明涉及一种制备转基因植物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(a)提供一种植物细胞，所述的植物细胞含有能够表达anti‑miRNA‑214的载体或者所述的植物细胞的染色体整合有anti‑miRNA‑214的核苷酸序列；(b)将(a)中所述的植物细胞再生为植株，从而获得所述的转基因植物。实验证实本发明方法制备的转基因植物可通过口服食用将anti‑miRNA‑214的序列递送至肿瘤部位，并发挥抑制miRNA‑214的表达从而治疗肿瘤的作用。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗领域，具体地，涉及制备含有anti-miRNA-214的转基因植物的方法以及将anti-miRNA-214制备成口服组合物(如转基因植物)从而应用于肿瘤治疗的用途。

背景技术

microRNA来源于长度约1000bp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60-80nt的具有茎环结构的miRNA前体。前提miRNA转运至胞质后，被进一步切割成长约18-26nt的双链miRNA。双链miRNA解开后，成熟的miRNA进入RNA诱导基因沉默复合物(RNA-induced si lencing complex，RISC)，与互补mRNA完全或不完全配对，降解靶mRNA或阻遏其表达。

尽管microRNA在细胞总RNA中所占的比重很小，但由于miRNA参与生命过程中一系列的重要进程,包括早期胚胎发育、细胞增殖和细胞死亡、细胞凋亡与脂肪代谢、细胞分化以及在基因表达调控中的作用。而细胞增殖及凋亡等常在肿瘤中发生异常,因此推测miRNA的异常缺失、突变或过表达将导致人类疾病的发生。

在哺乳动物在长期的进化历程中，免疫调控已形成了一套复杂的自查与平衡系统，以保证机体在抵抗外源性抗原时可以保持一种自身耐受状态，这其中的许多机制现在仍未完全清楚。

通过对miR与疾病关系的系统理论研究，某些miR表达量的上升与癌症有正相关关系，本发明人创造性的提出了利用miR反义序列有针对性的降低特异miR的表达量，从而达到抑制、预防癌细胞生长繁殖的目的。

本发明人前期已通过研究发现，miR-214表达量与肺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、结直肠癌、宫颈癌、胰腺癌、前列腺癌等多种疾病相关。

化学合成的miRNA抑制剂是单链RNA分子，转染至细胞后特异性抑制miRNA功能，可以结合到成熟的miRNA上、干扰miRNA的生成、阻止miRNA加工、或者阻止其从核内转运到胞浆发挥作用。但是大批量应用化学合成的miRNA抑制剂成本太高，可行性低，因此，本领域迫切需要开发一种经济、高效地生产miRNA(尤其是miRNA-214)抑制剂的方法。

发明内容

本发明提供了一种利用植物作为发生器制备miRNA-214的抑制剂，从而通过低成本大批量地生产高质量的新型抗肿瘤组合物。

在本发明第一方面，提供了一种制备转基因植物的方法，所述方法包括步骤：

(a)提供一种植物细胞，所述的植物细胞含有能够表达anti-miRNA-214的载体或者所述的植物细胞的染色体整合有anti-miRNA-214的核苷酸序列；

(b)将(a)中所述的植物细胞再生为植株，从而获得所述的转基因植物。

在另一优选例中，所述的植物包括可食用的蔬果类植物，优选地，为来自豆科、禾本科、锦葵科、十字花科、茄科、葫芦科、蔷薇科、伞形科等的可食用蔬果类植物。

在另一优选例中，所述的植物包括生菜、大豆、番茄、玉米、棉花、油菜、白菜、马铃薯、西葫芦、黄瓜、木瓜、胡萝卜。

在另一优选例中，所述的植物包括生菜。