[发明专利]一种竹节皂苷提取物及其应用

说明书

技术领域

本发明提供一种竹节皂苷提取物及其应用，具体为竹节参皂苷IVa。

背景技术

非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类临床上广泛使用的抗炎药物，如心脑血管疾病预防及风湿性疾病、疼痛、运动损伤的治疗。近年来临床上推出的缓释剂和肠溶剂如双氯芬酸钠肠溶片，减少胃部损伤的毒副作用，但却把损伤转移到了远端的小肠^[1-3]；而随着胶囊内镜的发展，NSAID导致的肠道损伤的诊出率明显上升，被长期忽略的NSAID肠道损伤也越来越受到人们的关注^[3,4]，然而对这一威胁人类健康的并发症，目前在其防治上并没有统一合理的方法。因此，积极寻求防治NSAID所导致的并发症已十分迫切。

发明内容

本发明提供一种竹节皂苷提取物，包括作为活性成分的以下IVa化合物或其药学可接受的盐：

一种从竹节皂苷提取物中提取的单体化合物，包含所述的竹节皂苷提取物，以及药学可接受的辅料及载体。

将该竹节参皂苷IVa应用于非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤的药物上的应用。

经与对照组相比，模型组小肠粘膜通透性显著升高，小肠粘膜损伤评分增高，光镜可见小肠粘膜绒毛发生变性、坏死、脱落，大量炎细胞浸润。而竹节参皂苷IVa给药组小肠粘膜损伤及通透性改变明显变小，竹节参皂苷IVa对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。

附图说明

图1为伊文思蓝染色检测竹节参皂苷IVa对NASIDs模型小肠黏膜损伤的保护作用。

图2 HE染色观察竹节参皂苷IVa对小肠黏膜组织的保护活性，其中，a正常组；b模型组；c竹节参皂苷IVa5mg组；d竹节参皂苷IVa20mg组(HE 10×10)。

图3.竹节参皂苷IVa对GRP78表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。

图4.竹节参皂苷IVa对TNFa表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。

具体实施方式

实施例1

实验动物

湖北省动物实验中心提供：健康雄性BABL/c小鼠60只，体重18-24g左右，自然光照周期、于恒温、恒湿条件下标准配方的普通饲料喂养，自由进食进水。

仪器和试剂

倒置荧光显微镜：日本Nikon ECLIPSE TE2000-S；全波长酶标仪：Thermo Electron公司；凝胶成像系统(Gel Logic-200)：美国Kodak公司；高性能梯度PCR仪：德国Whatman Biometra公司；多功能荧光酶标仪：瑞士Tecan集团公司；ECL化学发光系统：上海欧翔科学仪器有限公司。

双氯芬酸：石药集团欧意药业有限公司，临用前用1％羧甲基纤维素配制0.5mg/ml；竹节参皂苷IVa：成都迪康科技制药公司，临用前用生理盐水溶解0.5mg/ml、2mg/ml；FD4：美国Sigma公司产品，临用前用PBS溶解配制成20mg/ml溶液；伊文氏蓝：临用前用生理盐水溶解配制成7.5mg/ml溶液。

对42只BABL/c小鼠行随机组，标记为：模型组、正常组、竹节参皂苷IVa5mg/kg、20mg/kg组，连续灌胃六天。于第四天给予双氯芬酸5mg/kg(10mg/ml)灌胃。于第七天对小鼠进行手术取材，行肉眼观察及相关的实验研究。

小鼠小肠组织的伊文思蓝染色：

小鼠术前禁食(12h)不禁水。劲椎脱臼处死，处死前30min尾静脉注射伊文思蓝，剖腹，分离小肠，PBS液冲洗内容物。沿肠系膜对侧切开小肠，粘膜面朝上平铺固定于玻璃板上，滤纸吸干多余水分，数码相机拍摄。

FITC-D检测小肠粘膜通透性：给小鼠10％水合氯醛行腹腔注射(0.2ml/只)，以四肢瘫软，呼吸心跳正常为标准，剖腹，距回盲部2cm处选4-5cm小肠，保持肠系膜血管血液供应正常，两端结扎，肠腔注入0.2ml异硫氰酸荧光素标记葡聚糖(FITC-D)，并予以保温，20min后活体取肝脏，称重、匀浆器冰上研磨，按1g/5ml加入1×PBS液，2000rpm/min、30min离心。取上清液于多功能荧光酶标仪(激发波长480nm和发射波长530nm)测量吸光度值，按标准曲线计算FITC-D含量，用统计学方法对实验数据进行分析。

每只小鼠取约2-3cm小肠组织，10％中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4um切片，HE染色，倒置荧光显微镜观察组织学改变，组织学评分采用Chiu肠粘膜损伤评分标准[参见表1]。