[发明专利]一种多重功能化石墨烯黑色素瘤传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种多重功能化石墨烯黑色素瘤传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在电极表面滴加6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的金杂化的巯基化石墨烯水溶液，干燥；

（3）将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的黑色素瘤捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）用3 μL浓度为5~15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为0.00001 ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的黑色素瘤抗原用于捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；

（6）将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的多重功能化石墨烯标记的黑色素瘤检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2.如权利要求1所述的一种多重功能化石墨烯黑色素瘤传感器的制备方法，所述多重功能化石墨烯标记的黑色素瘤检测抗体溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）多重功能化石墨烯的制备

将0.1 ~ 1.0 g氯化铁溶解在5 ~ 15 mL的乙二醇溶液中，随后加入1.0 ~ 2.0 g的醋酸钠、4 ~ 6 mL 乙二胺和0.4 ~0.6 mg的氧化石墨烯，将混合物溶液搅拌30 min，转入不锈钢反应釜中，200℃反应8 h，冷却至室温，用乙醇离心洗涤3次，真空下干燥，得到四氧化三铁纳米粒子功能化的磁性石墨烯；将10 ~ 30 mg该磁性石墨烯和20 ~ 60 mL的金纳米粒子溶液混合，震荡12 h，离心洗涤后，真空干燥，制得金纳米粒子和四氧化三铁纳米粒子功能化的石墨烯，即多重功能化石墨烯；

（2）多重功能化石墨烯标记的黑色素瘤检测抗体溶液的制备

将1 mL浓度为1 ~ 3 mg/mL的多重功能化石墨烯溶液与1 mL浓度为5 ~ 15 μg/mL黑色素瘤检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤，得到多重功能化石墨烯标记的黑色素瘤检测抗体孵化物，将其分散于1 mL、 pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得多重功能化石墨烯标记的黑色素瘤检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用。

3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种多重功能化石墨烯黑色素瘤传感器，其特征在于，用于黑色素瘤抗原的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；

（2）选择计时电流法对黑色素瘤抗原进行检测，将输入电压设置为-0.4 V，取样间隔设置为0.1 s，运行时间设置为400 s；

（3）当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为5 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线；

（4）将待测样品溶液代替黑色素瘤抗原标准溶液进行检测。