[发明专利]一种输尿管结扎诱导的非人灵长类动物肾纤维化模型的建立和应用

说明书

技术领域

本发明涉及疾病的动物模型建立，具体涉及一种输尿管结扎诱导非人灵长类动物肾纤维化模型的建立方法及应用。

背景技术

肾脏纤维化是一种病理生理改变，特征包括细胞外基质(ECM)的异常沉积、肾小球硬化和间质纤维化，是所有肾病的终末期表现。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍、以及免疫反应等各种致病因素刺激，造成细胞受损，引起肾实质巨噬细胞浸润。巨噬细胞释放细胞因子促使肾小管凋亡和成纤维细胞活化增殖，而肾小管细胞凋亡和坏死造成肾小管坏死和形成无小管肾小球。继而引起肾实质细胞表型变化，产生大量肌成纤维细胞，造成大量胶原沉积和积聚，使得肾实质逐渐硬化，形成瘢痕，直至肾脏完全丧失功能。肾纤维化通常是一个长期的过程，发病可以见于任何年龄阶段，成年人肾纤维化的主要原因是肥胖，糖尿病和高血压，其他原因包括肾毒性药物和感染等等。

目前肾纤维化的动物模型通常建立在啮齿类和兔实验动物上，但是，由于这些实验动物在进化关系、肾脏的组织结构和生化、以及造成的肾纤维化病变等与人类相距甚远，以其为研究对象所获得的实验数据对现实指导意义不大。实践表明，使用啮齿类动物和兔肾纤维化模型产生的实验结果在临床实验中很难得到验证，以此模型数据为基础进行药物开发的成功率亦较低。非人灵长类的解剖特点、各系统生理生化功能、病理变化、疾病症状、以及对治疗药物的反应性等与人类极为相近，是进行肾纤维化相关疾病研究、治疗、和进行药物临床前有效性和安全性评价的敏感动物。

随着肾纤维化发病分子细胞机制研究的不断深入，已经发现并确认多种抗肾纤维化的新药靶点。非人灵长类动物和人类的亲缘相近，靶点的结构和生物系统相似，可以提供很好的交叉反应性。因此建立非人灵长类肾纤维化模型可以满足肾纤维化治疗药物临床前评价的迫切需要，利用模型对肾纤维化研究的数据、对肾纤维化疾病诊断和治疗方案的评估等具有重要的临床应用指导意义。

发明内容

本发明建立了一种单侧输尿管结扎诱导的非人灵长类动物肾纤维化模型的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

a、麻醉实验猴，局部手术消毒后沿腹中线切开，打开腹腔，暴露手术视野；

b、顺沿单侧输尿管，在单侧肾下缘处以手术丝线于输尿管结扎两道，完全阻断该侧输尿管；

c、消毒手术切口后分层缝合伤口；

d、在不同时间点，采取样品(血液、尿液、组织等)测量肾纤维化的指标；

e、或取下左肾和右肾，于中性甲醛溶液中固定，进行组织切片和病理检查；

本发明的模型建立方法是利用猴子，结扎其单侧输尿管来诱导肾纤维化过程，同时保留另一侧肾脏的正常功能，作为自体对照，提供了正常肾脏纤维化水平的基础数据。同啮齿类动物以及兔相比，猴输尿管结扎后诱导的肾脏纤维化病变较为缓慢，其病理改变同人肾纤维化的病理特征相似，更符合人类肾纤维化病变过程。由于本方法诱导产生的肾病病变随时间慢性发展，该猴模型可以在不同病程时建立观察点，以利于纤维化病的研究和评估抗纤维化药物的效果。另外，该诱导的猴模型在建立单侧肾脏纤维化的不同病程时，可以手术摘除另一侧肾，使该猴依靠单侧纤维化的肾脏功能，则该模型可以直接用于肾纤维化病、肾功能缺失补偿及替代、以及抗纤维化药物的研究和评估。

本发明结合中国实验猕猴动物大量存栏的现状，在反复研究积累经验的基础上，创新使用食蟹猴(Macaca fascicularis)作为非人灵长类实验动物，经单侧输尿管结扎成功诱导产生肾纤维化病变。经病理切片检查验证，本方法可重复性地在实验猴肾中诱导出与人相似的典型的肾纤维化病变。

本发明所提供的一种非人灵长类动物单侧输尿管结扎诱导肾纤维化模型的建立方法，优选的是：创新的使用食蟹猴(Macaca fascicularis)作为非人灵长类实验动物。

本发明的优点是：

本发明的动物模型具有现有啮齿类和兔动物模型无法实现的应用价值：

a、非人灵长类动物在解剖特点、各大生理功能和生化系统、以及病理变化等方面与人类极为相近；

b、非人灵长类动物的生物靶点的结构和生物调控与人类相似，可为药物特异性(如抗体，核酸，蛋白类药物技术等)作用靶点提供很好的交叉反应性；

c、本模型产生的肾纤维化与人类肾纤维化在病程、病理改变等诸方面有高度的相似性；

d、采用中国猴场大量繁育的实验用猴，质量控制严格，遗传背景清楚，来源丰富。

本发明建立的非人灵长类动物模型在肾纤维化的各相关领域有广泛的用途，例如：