[发明专利]黄瓜CsMADS23基因过表达载体及其应用在审
申请号: | 201410659394.1 | 申请日: | 2014-11-19 |
公开(公告)号: | CN104480116A | 公开(公告)日: | 2015-04-01 |
发明(设计)人: | 胡丽芳;刘世强;贺浩华;杨寅桂;蒋伦伟;王义华 | 申请(专利权)人: | 江西农业大学 |
主分类号: | C12N15/29 | 分类号: | C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00 |
代理公司: | 南昌洪达专利事务所 36111 | 代理人: | 刘凌峰 |
地址: | 330045 江西省南*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 黄瓜 csmads23 基因 表达 载体 及其 应用 | ||
1.黄瓜CsMADS23基因,其特征在于,其核苷酸序列如 SEQ ID NO1所示。
2.一种黄瓜CsMADS23过表达载体,其特征在于,所述植物表达载体为PHB-CsMADS23,其含有黄瓜CsMADS23基因,黄瓜CsMADS23基因的上游连有双35S启动子。
3.一种黄瓜CsMADS23过表达载体,其特征在于,由下述方法构建而成:
根据CuGI上登录号为Csa011135的CsMADS23序列设计两端引物,其中MADS23-F引物引入了BamHI位点,MADS23-R引物引入了XbaI位点:MADS23-F:5’-aaaaGGATCCATGGGAAGAGGGAAAATAG-3’,CsMADS23-R:5’-aaaaTCTAGATTATTCCCTTTCTTGTAGATTTG-3’;以黄瓜花蕾的cDNA第一链为模板进行PCR扩增,获得CsMADS23全长;
回收CsMADS23的cDNA全长,将其连接到pMD18载体上,采用碱裂解法提取质粒DNA,通过PCR检测和酶切检测获得重组质粒pMD18-CsMADS23;
(3)使用BamHI和XbaI酶切pMD18-CsMADS23,回收CsMADS23片段,同时用BamH I和XbaI酶切PHB,回收后连接,转化感受态细胞,获得植物表达载体PHB-CsMADS23。
4.如权利要求1所述黄瓜CsMADS23基因的应用,其特征在于,黄瓜CsMADS23基因导入植物。
5.如权利要求3所述黄瓜CsMADS23过表达载体的应用,其特征在于,将获得的植物表达载体PHB-CsMADS23转入农杆菌GV3101,再转入到拟南芥中,对获得的转基因植株进行PCR,RT-PCR验证后进行植株的表型分析,获得的CsMADS23转基因植株。
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