[发明专利]黄瓜CsMADS23基因过表达载体及其应用在审

专利信息
申请号: 201410659394.1 申请日: 2014-11-19
公开(公告)号: CN104480116A 公开(公告)日: 2015-04-01
发明(设计)人: 胡丽芳;刘世强;贺浩华;杨寅桂;蒋伦伟;王义华 申请(专利权)人: 江西农业大学
主分类号: C12N15/29 分类号: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00
代理公司: 南昌洪达专利事务所 36111 代理人: 刘凌峰
地址: 330045 江西省南*** 国省代码: 江西;36
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摘要:
搜索关键词: 黄瓜 csmads23 基因 表达 载体 及其 应用
【权利要求书】:

1.黄瓜CsMADS23基因,其特征在于,其核苷酸序列如 SEQ ID NO1所示。

2.一种黄瓜CsMADS23过表达载体,其特征在于,所述植物表达载体为PHB-CsMADS23,其含有黄瓜CsMADS23基因,黄瓜CsMADS23基因的上游连有双35S启动子。

3.一种黄瓜CsMADS23过表达载体,其特征在于,由下述方法构建而成:

根据CuGI上登录号为Csa011135的CsMADS23序列设计两端引物,其中MADS23-F引物引入了BamHI位点,MADS23-R引物引入了XbaI位点:MADS23-F:5’-aaaaGGATCCATGGGAAGAGGGAAAATAG-3’,CsMADS23-R:5’-aaaaTCTAGATTATTCCCTTTCTTGTAGATTTG-3’;以黄瓜花蕾的cDNA第一链为模板进行PCR扩增,获得CsMADS23全长;

回收CsMADS23的cDNA全长,将其连接到pMD18载体上,采用碱裂解法提取质粒DNA,通过PCR检测和酶切检测获得重组质粒pMD18-CsMADS23;

(3)使用BamHI和XbaI酶切pMD18-CsMADS23,回收CsMADS23片段,同时用BamH I和XbaI酶切PHB,回收后连接,转化感受态细胞,获得植物表达载体PHB-CsMADS23。

4.如权利要求1所述黄瓜CsMADS23基因的应用,其特征在于,黄瓜CsMADS23基因导入植物。

5.如权利要求3所述黄瓜CsMADS23过表达载体的应用,其特征在于,将获得的植物表达载体PHB-CsMADS23转入农杆菌GV3101,再转入到拟南芥中,对获得的转基因植株进行PCR,RT-PCR验证后进行植株的表型分析,获得的CsMADS23转基因植株。

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