[发明专利]一种鸡传染性支气管炎病毒IBV-K136、利用其制备的单克隆抗体细胞株3D5、单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗体工程技术领域，具体涉及一株鸡传染性支气管炎病毒IBV-K136、利用其制备的单克隆抗体细胞株3D5、单克隆抗体及其应用。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是一种急性、高度传染性的病毒性呼吸道疾病由鸡传染性支气管炎病毒引起。以病鸡咳嗽、气管啰音、打喷嚏为特征，雏鸡最易感。尽管广泛使用传染性支气管炎弱毒疫苗和灭活疫苗，但由于该病血清型较多，型与型之间的交叉保护较弱以及新型毒株的不断出现，导致其防治较困难，严重威胁了我国养鸡业的发展。

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis virus，IBV)为冠状病毒科冠状病毒属，其基因组为不分节段单股正链RNA，本身具有感染性。基因组全长27nt左右(不同毒株略有不同)，共编码3种结构蛋白，分别为纤突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)，其中S基因是IBV抗原变异最主要的基因，在病毒血清学分类中起重要作用。N基因是IBV的最保守的基因，在IBV鉴别诊断中起重要作用。

针对IBV的检测方法目前主要有：病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、PCR检测、环介导等温扩增技术等方法。其中以间接ELISA和PCR检测方法较为快速准确。间接ELISA方法具有检测成本低，灵敏度高，特异性好，适合大量样品等特点。但目前所建立的ELISA方法主要针对IBV抗体，针对IBV抗原的检测方法极少，该技术瓶颈有待突破。而要实现针对IBV抗原的检测方法，则需要性能优异的鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体作为基础，相应的，就必须建立生产上述单抗的细胞株作，而能否构建适宜的细胞株又有赖于有效的方法及病毒毒株的特性。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一株适用于感染生物后制备单克隆抗体杂交瘤细胞株的鸡传染性支气管炎病毒，同时提供一种利用上述毒株制备的鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株、该抗体以及该抗体的应用。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis virus)IBV-K136，其保藏编号为CCTCC NO.V201320。

上述一种鸡传染性支气管炎病毒IBV-K136可以用于制备鸡传染性支气管炎病毒抗体。

上述一种鸡传染性支气管炎病毒IBV-K136可以用于制备鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体细胞株。

利用上述一种鸡传染性支气管炎病毒IBV-K136制备的一种鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体细胞株3D5（杂交瘤细胞株3D5），其保藏编号为CCTCC C2014155。

一种鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体，上述细胞株3D5制备的。

该单克隆抗体可以用于制备鸡传染性支气管炎病毒检测试剂盒或鸡传染性支气管炎病毒检测试纸。

优选的，所述试剂盒对鸡传染性支气管炎病毒的检测方法可以是ELISA法。

优选的，所述试纸对鸡传染性支气管炎病毒的检测方法可以是胶体金法。

在以上技术方案中，保藏编号为CCTCC NO.V201320和CCTCC C2014155两种生物材料的保藏单位均为“中国典型培养物保藏中心”，其地址为“湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内”，其中CCTCC NO.V201320的保藏日期为2013年6月28日，CCTCC C2014155的保藏日期为2014年9月4日。

在以上技术方案中，IBV-K136毒株为地方流行的肾型传染性支气管炎病毒毒株、是通过筛选获得，以该毒株为抗原扩增后进行动物免疫，将免疫血清与骨髓瘤细胞融合筛选出杂交瘤细胞，利用该方法筛选出性能优异的鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体细胞株3D5，再对细胞株3D5进行培养以大量表达单克隆抗体。利用上述流程制备的单抗效价高、抗原抗体反应速度快、特异性强，尤其适用于进一步制备鸡传染性支气管炎病毒抗原诊断试剂盒，相应的检测方法可以是双抗夹心ELISA法或胶体金法等。

具体实施方式

以下实施例中的实验方法，若无特殊说明，均为常规方法。以下实施例中所用到的实验材料，若无特殊说明，均为自常规渠道(如普通生化试剂商店)购买得到。

以下实施例中的生物材料来源如下：

IBV-K136株：2013年6月28日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO.V201320。

SPF鸡胚：购自山东省六一农场有限责任公司。