[发明专利]基于SSR扩增反应方法的棉花DNA一步快速提取方法

权利要求书

1.一种基于SSR扩增反应方法的棉花DNA一步快速提取方法，步骤如下：

第一步，将在液氮下将棉花幼嫩叶片研磨成粉状；

第二步，将其放入含NaOH、NaCl、β-巯基乙醇SDS和PVP的提取混合液中；

第三步，热裂解后加入盐酸离心，取上清，即可直接用于SSR-PCR扩增方法。

2.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于：所述棉花幼嫩叶是棉花真叶。

3.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于：所述提取混合液成分为：0.1 mol/ L NaOH、0.7 mmol/L NaCl、20mmol/Lβ-巯基乙醇、2%SDS和2%PVP。

4.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于：所述的热裂解是在90℃下进行。

5.如权利要求1所述的提取方法,其具体步骤如下：

取棉花真叶于研钵中,加入液氮迅速研磨使成均匀粉状，在样品未融化之前加入65℃预热的提取混合液，上下颠倒充分混匀后，置90℃水浴热裂解，取出后加入0.1mol/ L HCl溶液，混匀，离心10min取上清，放入-20℃下保存备用。

6.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,其具体步骤如下：

取棉花真叶一片于研钵中,加入液氮迅速研磨使成均匀粉状，在样品未融化之前加入65℃预热的提取混合液500μl，上下颠倒10次充分混匀后，置90℃水浴10 min，取出后加入300μL 0.1mol/ L HCl溶液，混匀，13000g离心10min，取上清，放入-20℃下保存备用。

7.如权利要求1-6任一项所述提取方法得到的棉花DNA进行SSR-PCR扩增方法，其特征在于：PCR扩增反应总体积为SSR_PCR反应体系为15μL体系，其组成为1.5μL DNA模板，4.5μL 2×Buffer，0.1mmol/L dNTPs溶液3ul，棉花引物1.5μL，其中正反引物各0.75μL，0.24μL Tks Glfex DNA聚合酶，4.26μL DDW 。