[发明专利]抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外制备方法

权利要求书

1.一种抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外制备方法，其特征在 于，按照以下步骤进行：

(1)无菌环境下采取鸡脾脏或鸡血，用鸡脾脏或外周血制备淋 巴细胞单层。无菌静脉采取动物全血20-30ml，加0.8％肝素溶液0.2m1 抗凝，静置30-60min，用带胶球吸管吸取红细胞层以上的所有血浆， 特别是紧接红细胞层上的白细胞层要尽量吸取，分装于消毒离心管 内，用PBS(pH为7.2)液反复洗涤2-3次，离心速度800-1200转/分， 然后用含30％犊牛血清水解乳蛋白40ml进行白细胞培养，混合均匀 后分装于容量100ml细胞培养瓶中，塞紧瓶塞，置37℃细胞培养箱 中，经2-3天，白细胞均匀贴壁，即制成淋巴细胞单层；

(2)对所制备的淋巴细胞单层进行传代培养：显微镜下观察(1) 中所制备的淋巴细胞单层，确认其生长状态良好即可进行细胞的传代 培养；

(3)病毒的提纯：将鸭瘟病毒接种于9-10日龄的鸡胚尿囊腔内， 37℃培养48-120h增值病毒，将收集的尿囊液反复冻融三次后，超声 破碎处理，离心，取沉淀，根据病毒粒子的大小利用密度梯度高速离 心，得到较为纯正的病毒；

(4)抗鸭瘟病毒特异性转移因子的制备：当传代的淋巴细胞长 成单层后，用植物血凝素(终浓度为100mg/L)和鸭瘟病毒(终浓度 为1000-1500血凝单位/ml)诱导培养，离心培养2-3天后，8000转/ 分、20-30min离心细胞培养液，取上清液，将其置于4℃下磁力搅拌 透析18-24h，超滤除菌，即获得抗鸭瘟病毒特异性转移因子。

2.根据如权利要求1所述的抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外 制备方法，其特征在是：刺激鸭脾细胞和鸭血淋巴细胞增殖的植物血 凝素剂的质量浓度为50-100mg/L。

3.根据如权利要求1所述的抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外 制备方法，其特征在是：制备淋巴细胞单层以及细胞培养均在无菌状 态下进行。

4.根据如权利要求1所述的抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外 制备方法，其特征在是：离心时均需在4℃进行。

5.根据如权利要求1所述的抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外 制备方法，其特征在是：超滤除菌所需滤膜为0.22μm滤膜。