[发明专利]多肽、融合酶及其制备方法和用途

说明书

多肽、融合酶及其制备方法和用途。本申请提供了新的含纤维素结合域的多肽，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一个氨基酸取代、缺失或添加的序列。本申请还提供了上述多肽与酶融合得到的融合蛋白、编码所述融合蛋白的核酸分子、含有该核酸分子的表达载体和宿主细胞，以及生产上述融合蛋白的方法。此外，本申请还涉及提高酶活性的方法。

发明领域

本发明属于生物学与酶工程工业领域，具体地，涉及与多肽融合的酶类、其编码核酸，以及包含所述编码核酸的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及上述融合酶类的制备方法及其用途。

发明背景

纤维素结合域(Cellulose binding domain,CBD)是存在于纤维类原料酶(如纤维素酶)中的相对分子质量在0.4×10⁴～2.0×10⁴Da不等的片段，可特异结合纤维素基质，后者为纤维素酶的底物。CBD序列可以与纤维素酶融合，改善其对底物的结合能力[1,2,3,4]。

脂肪酶，也是一种重要的工业用酶，具有非常广泛的应用前景。为了更好地使其适应工业化需求，研究者们对其热稳定性、产量和活性的改造投入了很多精力。

然而，关于CBD序列对脂肪酶活性影响的研究，还鲜有报道。

发明内容

第一方面，提供了多肽，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的序列。

在具体的实施方案中，上述氨基酸序列为纤维素结合域序列。

在优选的实施方案中，本申请的多肽由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。在本文中，由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的多肽被命名为CBD^new。

在优选的实施方案中，本申请的多肽序列为由上述(a)所述的序列经过取代、缺失或添加一个或几个，优选1个-10个，更优选2个-8个，更优选3个-5个氨基酸后得到的序列。

第二方面，提供了多核苷酸，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一个氨基酸取代、缺失或添加的序列；以及

(b)在严格条件下与a)中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

在一实施方案中，本申请的多核苷酸包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。在优选的实施方案中，上述多核苷酸由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列组成。

第三方面，提供了融合蛋白，其包含第一方面所述的多肽部分以及酶部分。在一些实施方案中，所述酶为水解酶，优选为脂肪酶。在更优选的实施方案中，所述脂肪酶为米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶RML。在优选的实施方案中，所述多肽部分与酶部分优选通过连接子连接。

第四方面，提供了核酸分子，其编码上述融合蛋白。

第五方面，提供了表达载体，其包含编码上述融合蛋白的核酸分子。

在某些实施方案中，本发明的表达载体还包含调节多核苷酸表达的调控序列，其中多核苷酸与调控序列可操作地连接。在优选的实施方案中，所述表达载体为pET30a。

第六方面，提供了包含本申请的融合蛋白、或核酸分子、或表达载体的宿主细胞。在优选的实施方案中，宿主细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21。

第七方面，提供了制备本申请的融合蛋白的方法，其包括：