[发明专利]酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法

权利要求书

1.一种酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法，其特征是该方法包括以下内容：

一.酪氨酸酶生物传感器的制备

酪氨酸酶生物传感器包括一玻碳电极，在玻碳电极的检测端表面沉积有聚硫堇分子，聚硫堇分子外表面偶联一层戊二醛薄膜，在戊二醛薄膜外侧键合酪氨酸酶分子；

二.检测溶液中酚类化合物

以酪氨酸酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，三电极系统与电化学工作站连接，将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中还原电流大小，然后根据酚类化合物浓度与还原电流的线性回归方程，测定待测溶液中的酚类化合物的种类和含量。

2.根据权利要求1所述的一种酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法，其特征是所说的酪氨酸酶生物传感器的制备包括以下步骤：

a.沉积聚硫堇分子膜，在一清洗好的玻碳电极的检测端表面用电化学方法沉积硫堇分子，得到聚硫堇分子膜修饰电极，晾干备用；

b.偶联戊二醛，向步骤a中制得的硫堇修饰电极上滴加配制好的戊二醛水溶液，通过化学偶联反应使戊二醛与玻碳电极上的硫堇共价偶联，得到戊二醛-硫堇修饰电极；

c.固定酪氨酸酶，在步骤b中制得的戊二醛-硫堇修饰电极上滴加配制好的酪氨酸酶溶液，通过化学偶联反应使酪氨酸酶固定于修饰电极的戊二醛上，得到酪氨酸酶生物传感器。

3.根据权利要求2所述的一种酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法，其特征是所述步骤a中，硫堇的浓度为0.1mmol/L-1.0mmol/L，所用溶剂为Britton-Robinson缓冲溶液，包括硼酸、醋酸、磷酸和氢氧化钠，缓冲溶液浓度为10-100mM，pH值为4.0-9.5，扫描起始电压为0.4V，终止电压为0.4V，最高电压为1.1V，最低电压为-0.4V，扫面方向负向，扫描循环为20-100次，扫描速度为100mV/s；所述步骤b中的戊二醛水溶液体积百分比浓度为5-25％，用量为5μL-10μL，反应时间为15分钟-1小时；所述步骤c中酪氨酸酶浓度范围为0.1mg/mL-1mg/mL，用量为5μL-10μL。

4.根据权利要求1所述的一种酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法，其特征是所述的测定待测溶液中的酚类化合物为苯二酚，特别是对苯二酚或邻苯二酚，对苯二酚和邻苯二酚的浓度线性检测范围均为5×10^-7～1×10^-4M。

5.根据权利要求1所述的一种酪氨酸酶生物传感器检测溶液中酚类化合物的方法，其特征是所说的根据酚类化合物浓度与还原电流的线性回归方程，测定待测溶液中的酚类化合物的含量，电流信号变化公式为：P＝I_b-I_a，式中P为酚类污染物溶液处理前后电流信号变化量；I_a为修饰后玻碳电极在空白缓冲溶液中扫描的电流；I_b为酚类污染物溶液滴加到检测缓冲溶液后扫描的电流，对苯二酚浓度与还原电流变化的线性回归方程为：

P_HQ＝67.582-5.4614lgC_HQ    (1)

式(1)中，P_HQ为对苯二酚检测时电流信号变化值，单位为μA；C_HQ为待测溶液中对苯二酚的浓度值，单位为M；以底物浓度为横坐标，所对应的电流信号变化值作为纵坐标，作校正曲线，找出校正曲线的线性范围后，所得到相关系数R²，式(1)的相关系数为R²＝0.9502，检测下限为5×10^-8M；邻苯二酚浓度与还原电流变化的线性回归方程为：

P_CC＝86.954-7.0386lgC_CC    (2)

式(2)中，P_CC为邻苯二酚检测时电流信号变化值，单位为μA；C_CC为待测溶液中邻苯二酚的浓度值，单位为M；式(2)的相关系数为R²＝0.9751，检测下限为1.5×10^-8M。