[发明专利]一种针对宫颈癌具有免疫原性的蛋白及其应用

权利要求书

1.一种多核苷酸，其编码一种针对宫颈癌具有免疫原性的融合蛋白，所述融合蛋白为在减毒重组李斯特菌中分泌表达的HPV16E7的融合蛋白，所述融合蛋白为单核细胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO与HPV16E7的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述多核苷酸中编码HPV16E7的基因序列为SEQ ID NO.6。

2.一种载体，其含有权利要求1所述多核苷酸。

3.一种宿主细胞，其被权利要求2所述载体转化。

4.如权利要求3所述宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为单核细胞增生性李斯特细菌。

5.如权利要求4所述宿主细胞，其特征在于，所述单核细胞增生性李斯特细菌的血清型为1/2a。

6.一种重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌，所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌的基因组中，野生型的hly编码基因被替换成了氨基酸序列为SEQ ID NO.3的融合蛋白的编码基因，所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌能融合表达单核细胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO与HPV16E7的融合蛋白，所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌的基因组中编码所述融合蛋白的编码基因为权利要求1所述的多核苷酸。

7.如权利要求6所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌，其特征在于，所述单核细胞增生性李斯特细菌的血清型为1/2a。

8.如权利要求6所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌，其特征在于，所述单核细胞增生性李斯特细菌为单核细胞增生李斯特菌株yzuLM4。

9.如权利要求6-8任一所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌的构建方法，包括下列步骤：

1)合成HPV16E7蛋白编码基因片段；从单核细胞增生李斯特菌株中扩增出待插入位点的上游同源臂片段hlya和下游同源臂片段hlyb；

2)将步骤1)获得的HPV16E7编码基因及上下游同源臂片段拼接成hlya-HPV16E7-hlyb融合片段并连接入穿梭质粒获得重组穿梭质粒；

3)将步骤2)获得的重组穿梭质粒转化单核细胞增生性李斯特细菌,经过抗性和温度双压力筛选，再通过无抗性传代得到无抗性基因的重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌。

10.权利要求6-8任一所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌在制备宫颈癌疾病疫苗上的用途。

11.一种疫苗，包括权利要求6-8任一所述重组减毒单核细胞增生性李斯特细菌。